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1、4种国产金免疫层析试验试剂检测HBsAg应用评价陈华根宋强刘小花(成都市新都区人民医院成都新都610500)【摘要】对4种国产金免疫层析试验(GICA)试剂进行干扰和灵敏度试验，评价试剂临床应用价值。【关键词】金免疫层析试验；乙肝病毒表面抗原；检测；评价【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2015)23-0333-02我国是乙肝病毒感染大国，HBsAg—般人群携带率9.09%⑴。作为判断乙肝病毒感染和诊断乙型肝炎的病毒标志物，HBsAg是感染性疾病标志物检测中应用最为广泛的项目。传统的凝集试验己逐渐弄去，基木采用各种免疫标记技术检测。G
2、ICA自20世纪80年代运用于临床以来，已大量用于HBsAg检测。我们选用具有国家药品监督管理局批准文号的4个厂家的GICA试剂，进行干扰和灵敏度试验，评价其临床应用价值。1•材料和方法1.1试剂和仪器GICA试剂，北京蓝十字生物药业有限公司产品；北京万泰生物药业有限公司产品；广州万孚生物技术有限公司产品；厦门英科新创公司产品。酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂采用厦门英科新创公司产品。洗板机系热电Wellwashplus,酶标仪系芬兰WellscanMK3。1.2样本定值血清，分别为lng/ml>2ng/ml>5ng/ml和>10000ng/ml,购于北京康彻斯
3、坦公司,ELISA法基线测定lng/ml>2ng/ml和5ng/ml的S/CO均值分别为3.4、7.3和13.1；溶血样本,抽全血3ml,自然收缩后3000转/min,离心15分钟，取血清利用ELISA法平行检测HBsAg,S/CO均值为20.4”然后将盛血试管放入・20°C冰箱冷冻过夜保存,解冻后3000转/min离心15分钟，是为溶血样本；黄疸血样本,TB122?mol/L/ELISA法平行测定HBsA已S/CO均值为18.3；脂血样本，TG11.5mmol/L,ELISA法平行测定HBsA爲S/CO均值为15.8。1.3方法严格控制实验条件，室温18°C-25°C
4、,湿度40%〜60%,光线充足。严格按照试剂说明书要求操作，各类样本平行测定5次。检测线和质控线同吋出现红色为阳性。2.结果灵敏度试验，4种GICA试剂检测lng/ml>2ng/ml>5ng/ml和>10000ng/ml定值血清，15秒〜25秒内都能出现质控带。2ng/ml血清20秒〜25秒内出现检测带，至30分都呈极浅红色，吋序上检测带出现在质控带之后；5ng/ml血清15秒〜20秒出现检测带，时序上与质控带基本同步出现，至30分检测带呈浅红色；>；10000ng/ml血清10秒〜15秒岀现检测带，时序上早于质控带，至30分检测带呈红色，颜色明显深于质控带；
5、lng/ml血清至30分都未见检测带呈色。干扰试验，4种GICA试剂检测溶血样本、黄疸血样本和脂血样本，都能在25秒内出现红色的检测带和质控带。3.讨论HBsAg是由乙肝病毒S基因编码含226个氨基酸的乙肝病毒外膜蛋白，常与Dane颗粒并存，因此，把HBsAg作为乙肝病毒感染和诊断乙型肝炎的指标⑵。检测HBsAg的标记免疫方法有多种，如放射免疫、酶免疫、金标免疫及发光免疫。临床运用最广泛的是酶免疫测定(ELISA),国产批批检合格ELISA试剂检测HBsAg,检测下限可低于0.5ng/ml,接近或达到进口试剂水平［3］。ELISA环节影响因素多，从样本的采集和保存、试剂
6、温度平衡、加样、温育、洗涤、显色比色到结果判读都需要严格控制、正规操作，U需要冰箱、加样器、温育箱、洗板机和酶标仪等设备。溶血、脂血、黄疸血等样本都会对检测结果造成影响，也有报道高浓度HBsAg值因hook效应致阴性检出［4・5］。GICA自首次用来检测HCG以来，也人量用于感染性疾病标志物检测。因其具有简便快速，室温存放，无需设备，影响因素少，安全等特点，尤其适合床旁检验。本次用GICA试剂检测各种样本HBsAg实验表明，溶血、脂血及黄疸血等外源性标本影响因素对检测结果无影响。各种试剂对HBsAg浓度lng/ml(S/CO均<3.4)都无法检出,对于HBsAg浓度2n
7、g/ml(S/CO均值7.3)检测带呈色极弱,因此GICA试剂检测HBsAg的检测下限应在2ng/ml左右，而与一些试剂盒本身标明检测灵敏度lng/ml有岀入，检测HBsAg浓度>10000ng/ml样本，检测带呈色早而深”通常血中高浓度HBsAg应无hook效应影响。临床实践中，常有不少低浓度HBsAg阳性者，如应用GICA检测HBsAg,势必造成漏检，因此，GICA不宜用于临床HBsAg检测。血站系统应用GICA检测义务献血者HBsAg有一定实际意义,因系初筛，可以检测出大部分HBsAg阳性者，从而降低劳动强度，减少耗材消耗，对
