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1、痰瘀同治方对痰瘀互结证冠心病小型猪心肌组织保护作用［摘要］目的：观察痰瘀同治方对痰瘀互结证冠心病小型猪心肌组织的保护作用。方法：将36只中国小型猪随机分为正常对照组、模型组、丹萎片组和痰瘀同治方髙、中、低剂量组（生药2.0,1.0,0.5g•kg-1）,每组6只；除对照组外，其他各组高脂饲料喂养2周后，采用介入技术球囊损伤冠状动脉左前降支内皮，术后继续高脂饲料喂养8周，制备小型猪冠心病痰瘀互结证模型；术后给药8周，分别于0周（实验前）、高脂2周（术前或给药前）、高脂6周（给药后4周）、高脂10周（给药后8周），观察各组动物血清超氧
2、化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；同时实验结束后进行心肌酶谱检测和HE染色病理观察，采用透射电子显微镜观察心肌细胞超微结构的改变。结果：与对照组比较，模型组自第2周起至实验结束，血清SOD活性明显下降，而MDA含量明显上升（P2.2分组及给药将36只小型猪随机分为6组（每组6只，雌雄不拘）：正常对照组、模型组、丹萎片组（0.24g-kg-1）,痰瘀同治方高、中、低剂量组（生药2.0,1.0,0.5g•kg-l）o术后第2天每天上午将药物拌于饲料中喂养，连续给药8周。2.3血清心肌酶谱检查各组动物在实验结束（给药后8周
3、），锁骨下静脉取血3mL,1600Xg室温离心10min,分离血清，采用全自动生化分析仪进行血清心肌酶测定。心肌酶谱包括LDH,CK和CK-MB同工酶。2.4血清S0D活性和MDA含量的检测各组动物分别于0周（实验前）、高脂2周（术前或给药前）、高脂6周（给药后4周）、高脂10周（给药后8周）禁食14h后，锁骨下静脉取血3mL,1600Xg离心10min,分离血清，采用比色法进行SOD活性和MDA含量的测定，具体操作按试剂盒说明进行。2.5心肌组织病理观察实验结束后（给药后8周），各组动物颈动脉放血处死，取心脏梗死区/非梗死区交界
4、的心肌组织，10%中性福尔马林溶液固定后，常规石蜡包埋、切片，苏木精和伊红（HE）染色后，观察心肌组织的病理形态学改变。2.6心肌组织超微结构观察取心脏梗死区/非梗死区交界的心肌组织块大小约1mm3,浸入4%戊二醛磷酸缓冲液（pH7.2）固定。按照操作流程进行PBS冲洗、梯度脱水、包埋浸透、超薄切片等过程。将厚度为50nm的组织超薄切片经过醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后，采用日立H7500型透射电子显微镜观察心肌组织超微结构的改变。2.7统计学分析实验结果以土s表示，采用One-WayANOVA（单因素方差分析）方法，方差齐性应用St
5、udent-Newman-Keuls检验，方差不齐采用Tamhane,sT2检验。P尽管心肌组织和细胞缺血性损伤机制涉及冠心病病理机制的多个环节，但从中医的角度分析则与痰、瘀密切相关。因此本研究采用痰瘀同治方对心肌缺血过程进行干预。结果显示痰瘀同治方在实验第10周时能够明显增加冠心病痰瘀互结证小型猪体内S0D活性，减轻心肌细胞膜的脂质过氧化，因此减少MDA含量，提示通过对SOD活性的升高以及MDA含量减少达到阻止心肌细胞损伤甚至死亡的目的。由此痰瘀同治方中、高剂量可以保护心肌细胞的完整性,减少心肌组织缺血损伤程度和心肌细胞内同工酶
6、的逸出，表现在CK,LDH活性明显降低，对缺血缺氧损伤心肌组织病理形态和心肌组织超微结构都出现不同程度的改善。痰瘀同治方由丹参、川苇、人参等多味中药组成，主要针对冠心病痰瘀互结证进行对证治疗。其中丹参、川苇主要行活血化瘀，行气止痛之效。目前研究认为二者针对心肌缺血具有抑制血小板聚集，调节血管活性状态，保护血管内皮细胞的作用［6-7］。同时方中山楂能够降低血脂［8］,对缺血心肌具有一定的保护作用［9］。从本研究结果可以看出，针对冠心病痰瘀互结证的特点，从"痰”和“瘀”的角度进行对证治疗可以明显减轻心肌缺血损伤程度，保护心肌细胞，其机
7、制可能与对抗自由基，降低脂质过氧化反应相关。以上从不同角度的研究表明痰瘀同治方对痰瘀互结冠心病小型猪模型心肌组织和细胞具有明显的保护作用，但是其进一步的作用机制还有待于阐明。[参考文献][1]戴金，江丹娜，毛威，等.痰瘀同治颗粒对冠心病痰瘀互结证中医证候和PPARY表达的影响[J].中华中医药杂志，2010,25(7)：1112.[1]黄海军，陈凤娟，周迎春.“痰瘀相关”与冠心病的辨证论治[J].中国中医药信息杂志，2009,5(16)：7.[2]刘建勋，李欣志，任建勋.中医证候模型拟临床研究概念的形成及应用[J].中国中药杂志，
8、2008,33(14)：1772.[3]ZhouR,XuQ,ZhengP,etal.Cardioprotectiveeffectoffluvastatinonisoproterenol-inducedmyocardialinfarctioninra
