凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子和细胞黏附蛋白基因克隆与序列分析

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1、分类号UDCS917硕士学位论文凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子和细胞黏附蛋白基因的克隆与序列分析论文答辩日期2Q12生§月2垒旦学位授予日期2Q12生鱼月2墨旦广西大学学位论文原创性和使用授权声明YIll12l14lloLII7M3I18ll嶝本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下

2、所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。口不保密。(请在以上相应方框内打“√")论文作者签名：复磊磊指导教师签名：姆毫节作者联系电话：f2Z厶c}罗髻7仁日期：'lo12、∥．1少日期≥D肌莎．1／乡电子邮箱：；；z7时?踞@77．[一印本课题研究

3、受广西科学研究与技术开发计划项目“南美白对虾种质评定与高产品系选育，，项目资助纳滨对虾酚氧化酶原激活因子和细胞黏附蛋白基因的克隆与序列分析摘要无脊椎动物没有真正的抗体和获得性免疫系统，主要依靠先天性免疫系统来抵御外来病原微生物的侵害。酚氧化酶原激活系统(Prophenoloxidaseactivatingsystem，pro．PO)是无脊椎动物先天免疫机制中具有重要作用的免疫系统。酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidaseactivatingfactor，PPAF)和细胞黏附蛋白(Peroxinectin，PX)基因是酚氧化酶原激活系统

4、中的两个重要因子，这些免疫相关因子是如何抵御病原微生物入侵，如何参与机体的免疫活动一直以来受到广泛关注，因此本研究通过RACE方法首次克隆了PPAF的cDNA全长(GenBank登录号JQ684529)，及PX基因的部分序列，并对2个基因序列进行初步分析；通过半定量PCR分别对2个基因进行了不同组织的表达谱分析，研究结果如下：1．PPAF基因eDNA全长1986bp，其中含有一个1629bp开放阅读框(ORE)，两翼分别存在21bp(5’端)和336bp(3’端)的非翻译区。该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸，以SMART软件分析该氨基酸序列

5、，269．517a区域是其功能域，是胰蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶；494．502a区域有一个ALPHA．2巨球型免疫蛋白功能位点；316．321a区域有一个组氨酸酶活性位点。进化树分析表明凡纳滨对虾PPAF基因与斑节对虾的同源性最高，与果蝇、蚊的同源性最低。通过半定量PCR分析发现该基因在正常对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量没有差别，血液中的表达量明显高于其他组织；在感染IHHNV病毒的对虾的组织中的表达量下降明显，但是血液中的表达量仍明显高于其他组织。2．PX基因部分cDNA序列长度为1529bp，分析发现该序列含有1个1308bp的开

6、放阅读框(ORF)，3’端含有1个长度为221bp的非翻译区，开放阅读框共编码436个氨基酸。所获得的PX氨基酸序列理论等电点为4．64，分子量为48．86945KDa。经SignalP软件分析发现此氨基酸序列在72．86a区域有信号肽特征，82a是信号肽剪切位点的可能性最大。通过MotifScan程序对其氨基酸序列进行分析，发现该氨基酸序列在其336．378a处有氧化物酶功能域；在172．179a处有一个八肽铜锚定位点；进化性分析表明PX序列与斑节对虾编码的氨基酸序列最高，与果蝇的相似度最低：半定量PCR分析发现该基因在正常对虾的血液中表达量最

7、高，肝胰腺次之，在心脏、肠、胃和肌肉中的表达量没有差别，该基因在IHHNV病毒感染对虾的血液、心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量下降明显，但在血液和肝胰腺中的表达量仍比其他组织要高。关键词：Litopenaeusvannamei；酚氧化酶原激活因子；细胞黏附蛋白基因；IHHNV病毒；序列分析IICloningandsequenceanalysingoflitopenaeusvannameipolyphendoxidaseactivatedfactorandPeroxinectingeneABSTRACTInsteadofrealantibodi

8、esandacquiredimmunesystem，Invertebratesmainlyrelyontheinnateimmunesy