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《凡纳滨对虾ANT2基因的克隆及低温表达谱分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第36卷第1期水生生物学报Vol.36,No.12012年1月ACTAHYDROBIOLOGICASINICAJan.,2012DOI:10.3724/SP.J.1035.2012.00024凡纳滨对虾ANT2基因的克隆及低温表达谱分析1,211111殷勤崔亮彭金霞韦嫔媛谢达祥陈秀荔221王志伟李奎陈晓汉(1.广西壮族自治区水产研究所,广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,南宁530021;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100094)摘要:为研究凡纳滨对虾适应低温的分子机理,实验对从低温处理凡纳滨对虾抑制性消减文库中筛选出的一个360bpEST序列进行了研究。首先,
2、同源比对显示该EST片段与其他物种的ANT2基因高度同源,命名为凡纳滨对虾ANT2基因(LVANT2);其次,通过构建凡纳滨对虾肝胰腺全长cDNA文库,PCR扩增获得LVANT2基因的全长cDNA1540bp,其中包括1011bp的完整开放阅读框,编码336个氨基酸残基。然后,对基因进行了不同组织和低温处理的表达谱分析:(1)组织表达谱的结果显示,该基因在凡纳滨对虾肌肉组织中表达量最高;(2)在不同低温处理下的表达结果显示,该基因在15℃处理下基因表达量发生显著变化,13℃开始呈下调表达,11℃时表达量又升高;13℃低温处理不同时间发现该基因在12h内表达量发生显著变化,48h
3、后表达量最高。LVANT2基因的低温诱导表达模式说明其可能在凡纳滨对虾低温适应中发挥作用。关键词:LVANT2;表达量;抑制性消减文库;cDNA全长文库中图分类号:Q781文献标识码:A文章编号:1000-3207(2012)01-0024-05传统育种主要根据个体的表型进行评价和选前已经成为研究动植物生长、发育、抗逆、抗病等择。由于表型性状不仅取决于遗传组成,也受控于生理过程中相关基因差异表达及克隆的高效方法。环境条件,有时环境条件的影响可掩盖基因型上的腺苷酸转移酶(AdenineNucleotideTranslocase,差异。因此,仅从表型选择显然是不理想的。分子ANT)
4、是真核生物线粒体内膜上最丰富的蛋白质家族[8—10]标记技术的建立,使得遗传育种进入了一个新阶成员,作为代谢物载体参与线粒体的各种活动。段。新技术和传统育种方法相结合能大大加速育种在人类中发现ANT1、ANT2和ANT3这3个不同异工作进程。因此,与经济性状相关基因的克隆和鉴构体,并且不同异构体有着不同的染色体定位和组[11]定对于标记辅助选择的应用有重大意义。织表达模式。ANT蛋白通过2个分别含有通过对比两种或多种处于不同状态的个体的基ATP/ADP结合位点的亚基的构象变化来实现细胞[12]因表达差异,有助于基因功能和表达模式的研究。质中ADP和线粒体内ATP间的跨膜交换,是
5、生物[1][2][13]mRNA差异显示技术、cDNA代表性差异分析、体内能量产生和消耗的重要连接。但是目前国内[3][4][5,6]基因表达系列分析、消减杂交、抑制消减杂交外还很少有ANT2基因与低温相关性的报道。为开[7]和cDNA-AFLP技术是当前差异表达基因克隆的展耐寒选育相关分子辅助育种研究,我们构建了凡主要采样的方法。其中抑制消减杂交(Suppression纳滨对虾低温抑制消减文库,并分析了部分低温上subtractivehybridization,SSH)是以抑制性PCR技术调表达基因与耐寒性状的相关性,在此库中筛选获和消减杂交技术为基础来研究基因的表达差异,目
6、得了360bp的ANT2基因片段,然后通过全长文库收稿日期:2010-07-16;修订日期:2011-05-24基金项目:广西科学研究与技术开发计划(桂科攻10100007-2);广西壮族自治区直属公益性科研院所基本科研业务费(2060302GXIF-2010-04);现代农业产业技术体系建设专项资金(编号:CARS-47)资助作者简介:殷勤(1982—),男,湖北恩施人;硕士;主要从事动物遗传育种研究。E-mail:hnyinqin@yahoo.com.cn通讯作者:陈晓汉,E-mail:chnxhn@163.com1期殷勤等:凡纳滨对虾ANT2基因的克隆及低温表达谱分析25
7、克隆获得该基因全长,并对其进行了不同组织和低产物长度大小为746bp。分别用M13F(5-TGTAAAAC温处理下表达模式的研究,结果显示凡纳滨对虾GACGGCCAGT-3)与目的基因下游引物、M13R(5-GANT2基因呈低温诱导表达,可能在低温适应中起TTTTCCCAGTCACGAC-3)与目的基因上游引物扩作用。增cDNA全长文库获得LVANT2基因全长。1.5抑制消减杂交1材料与方法将凡纳滨对虾在13℃下饲养36h,然后取其肝1.1实验材料胰腺提取总RNA作为实验组样品,常温
