低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异表达文库的构建及分析.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhure2014，45(9)：1662—1668ISSN2095—119l：CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．9．1662低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异表达文库的构建及分析蒋小珍1，彭金霞2，韦嫔媛1‘2，陈晓汉2+(1广西大学动物科学与技术学院，南宁530005；2广西水产科学研究院／广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021)摘要：【目的】筛选出对虾耐寒相关基因，为今后

2、进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据。【方法】利用ss}I技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库，并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT—PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功能基因进行验证。【结果】在构建的正、负文库768个克隆中有152个为低温高表达克隆、331个为常温高表达克隆；将正文库100个克隆拼接可获得ESTs同源群39个，其中已知基因29个，主要涉及能量代谢、表达调控、信号传导、细胞免疫、抗细胞凋零、蛋白质加工及其他基因等；将负文库50个克隆拼接可获得ESTs同源群18

3、个，其中已知基因17个，主要涉及细胞免疫、维持细胞代谢、物质转运、信号传导及其他基因等。经RT—PCR验证，从正文库中筛选出的HSPBl、NGT4和NGTT基因在低温条件下的表达量显著高于常温。【结论】综合运用SSH、斑点杂交、克隆测序和RT—PCR可有效筛选并验证凡纳滨对虾耐寒相关基因，为揭示对虾耐寒分子调控机制奠定基础。关键词：凡纳滨对虾；抑制性消减杂交技术(SSH)；文库；耐寒相关基因；斑点杂交中图分类号：$945．46文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)09—1662—0

4、7ConstructionandanalysisofSSHlibraryofpacificwhitelegshrimpLitopenaeusvannameiexposedtolowtemperatureJIANGXiao—zhenl，PENGJing—xia2，WEIPing—yuanl⋯，CHENXiao—han2+(1AnimalScienceandTechnology-College，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2GuangxiKeyLabor

5、ator／ofAquaticGeneticBreedingandHealthyAquaculture，GuangxiAcademyofFisheriesScience，Nanning530021，China)Abstract：【Objective】SomecoldrelatedgenesofLitopenaeusVallllallleiwerescreenedtoprovidescientificrefer—encesfortm'therstudyoncoldresistantmolecularm

6、echanismofLitopenaeusVallllalllei．【Method】Twogenedifferentialexpressionlibrariesforthelow——temperatureprocessingandtheroom——temperaturewereconstructedbySuppressionSub—-tractiveHybridization(SSH)，tm'themmre，somecold—relatedgenesbydotblothybridizationwe

7、reachievedandverifiedbyESTssequenceandanalysis，Real—timePCRandSOforth．【Result】768cloneswerepickedfromtheforwardandreverselibrmyrandomlyandverifiedbydotblothybridization，152ofwhichwerehighexpressionclonesatthelow—temperaturegroupand331ofwhichwerehighex

8、pressionclonesattheroom—temperaturegroup．39Contigswereob—rainedaftersplicing100ESTssequencedfromthetbrwardlibrmy，including29knowngenes，whichmainlyrelatedtoenergy-metabolism，expressionandregulation，signaltransduction，cellularimmunity，antiapopto