梨酒专用酵母筛选及工程菌的构建

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1、梨酒专用酵母的筛选及工程菌的构建摘要以梨的果皮和梨园土壤作为分离源进行梨酒酵母的分离、筛选，并将其中发酵性能较好(鉴定为纯酿酒酵母)和产香性能较好(鉴定为非酿酒酵母)的两株酵母作为两亲本，利用PF(ProtoplastFusion，原生质体融合技术)化学融合法进行融合，选育出较原菌种生长繁殖速度快、发酵能力强、酒精产率高，同时兼备出酒风味浓厚、·酒质上乘且适合于梨酒专用的优良菌株。通过对酵母菌富集培养和分离，再通过TTC平板一级筛选，杜氏发酵管二级筛选，三角瓶发酵三级筛选，得到发酵性能较好的菌株YDJ05和产香性能较好的菌株YS03，并将

2、其作为原生质体融合的出发菌株。实验结果表明菌株YDJ05在梨汁中发酵能力较强，产酒精能力较好，即发酵7d产酒率达到8．8％，且残糖较低，可作独立的发酵菌株使用，经过26SrDNAD1／D2区序列分析，鉴定为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，命名为SaccharomycescerevisiaeYDJ05；菌株YS03经感官评定产香能力较强，并在梨汁中发酵第6d总酯含量达到0．389／L，香气最浓，经过26SrDNAD1／D2区序列分析，鉴定为东方伊莎酵母(1ssatchenkiaorientalis)，命名为lss

3、atchenkiaorientaIisYS03。将SaccharomycescerevisiaeYDJ05确定为原生质体融合时发酵能力较好的亲本菌株X；将lssatchenkiaorientalisYS03通过EMS诱变，得到了一株精氨酸营养缺陷型菌株G1，将其确定为原生质体融合时产香能力较好的亲本菌株Y。将亲本菌株X和Y采用蜗牛酶液在35℃下处理100min，得到最佳的原生质体形成率及再生率，分别为：93．6％和94．2％，27．8％和31．6％。60℃水浴加热灭活亲本菌株X的原生质体，确定灭活时间为14min。在以PEG．6000为促

4、融剂的条件下对两亲本菌株的原生质体进行融合，得到DJ01～DJ06六株融合子，其中DJ02的产酒精率、产香率等指标最优，分别达到了9．87％和0．379／L，通过26SrDNAD1／132区序列分析，融合子DJ02鉴定为酿酒酵母，命名为SaccharomycescerevisiaeDJ02。融合子DJ02具有发酵能力强、产香能力好的双亲优点，为适合酿造梨酒的酵母菌株。关键词：梨酒，酵母，筛选，原生质体融合，鉴定SCREENINGANDIDENTIFYOFSPECIALYEASTFORPEARWINEANDCONSTRUCTIONOFENG

5、INEERINGBACTERIUMABSTRACTUsedpearpeelandpearorchardsoilastheseparationsource，theexperimentseparatedandfilteredperryyeasts，andusedyeastswithgoodfermentationperfclfinanceandaromaproducingperformanceasparents．Theexcellentstrainsaresuitablefortheproductionofperry,whichhasfast

6、erpropagationspeed，strongerfermentationcapacityandwine-producingcapacitythantheoriginalstrainsbyprotoplastfusiontechnique．Throughenrichmentcultureandseparationofyeast，primaryscreeningbYTTCtablet，secondscreeningbyDufermentationtubeandthirdscreeningbYflaskfermentation．theex

7、perimentgotthestrainYDJ05whichhasoptimalfermentationperformanceandtheotherstrainYS03whichhasoptimalaromaproducingperformance．Theycanuseastheoriginalstrainforprotoplastfusion．TheresultshowedthatthestrainYDJ05madewineproductionratereach8．8％in7days，thenthecontentofresidualsu

8、garwaslow,whichhads仃ongfermentationcapacityandwine-producingcapacityinpearjuice．By26SrDNAtheDl／D