产共轭亚油酸丙酸菌的分离及发酵条件的研究

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1、Y90s-7￡s中图分类号：TS201．56密级：公开⑧浙炉工角矢尊硕士学位论文论文题目：芒基堑亚油酸亟酸菌的坌离壁蕉醛筮住鲍塑窒作者姓名：塞9爱鍪浙江工商大学硕士研究生论文产共轭亚油酸丙酸菌的分离及发酵条件的研究摘要共轭亚油酸是一种非常重要的不饱和脂肪酸，可看作亚油酸的衍生物。具有抗癌、抗粥状动脉硬化、提高机体免疫力等颇为引人注意的生理功能，广泛地应用于医药、食品和饲料等工业。国外已经研究了采用化学方法以及微生物转化法获取共轭亚油酸的多种工艺路线。近年来我国在化学方法以及微生物发酵法生产共轭亚油酸方面已

2、开始有少量的研究报道。本论文对丙酸菌生物转化法生成共轭亚油酸展开研究，主要包括产共轭亚油酸的丙酸菌菌种筛选，丙酸菌转化条件和高密度培养的研究，以及混合微生物转化工艺的研究等。本文从青贮饲料和干酪中分离得到的十几株疑似丙酸菌，对它们进行产共轭亚油酸能力和发酵产物丙酸的筛选，最终得到3株产共轭亚油酸的丙酸菌，其中一株产共轭亚油酸较高的菌株HZ—P．65(共轭亚油酸产生能力15．743ug／mE)，采用细菌形态学、电镜透射与扫描图像分析、生理生化等研究，初步鉴定该菌株为一株费氏丙酸杆菌。该菌株丙酸产量为9．64

3、9／L，丙酸与乙酸之比接近3．5：1。对不同培养基和培养条件进行了初步优化得出：培养基为MRS培养基，接种量为10％，培养温度为30。C，在培养之初加入LA，底物LA浓度为1000ug／mL，转化时问为120h，添加吐温-80作分散剂，LA浙江工商大学硕士研究生论文和SO的比为1：201对，CLA的最高产NJ拯lJ40．033lag／mL。研究了发酵技术对丙酸菌高密度培养及转化合成CLA的影响。pH-stat培养技术一定程度上克服了因pH值下降、酸积累而引起的抑制作用，菌体密度较高，共轭亚油酸产量也相对提

4、高。丙酸菌在pH6．0进行pH—stat培养，菌体密度可达12．42，CLA产量最高达45．801lag／mL。在此基础上，进行了间歇补料和连续补料培养，间歇补料培养菌体OD值最大达18．18，CLA产量最大值达50．93499／mL；连续补料培养菌体OD值最大达17．35，CLA产量最大值达55．86799／mL。由于丙酸菌和乳酸菌之问存在互生作用，且这两种菌均能转化合成共轭皿油酸，所以，我们对丙酸菌和乳酸菌混合培养转化合成共轭亚油酸进行了初步研究。主要从不同温度和不同接种比例考虑其对混合培养的影响，确

5、定了混合培养的最适培养温度30。C，最佳接种比例2：1和I：3。关键词共轭亚油酸，丙酸菌，生物转化，高密度培养，混合培养浙江工商大学硕士研究生论文SCREENINGOFPROPl0NIBACTERIASTRAINPRODUCINGCONJUGATEDLINOLEICACIDANDSTUDYoNIT’SFERMENTATIONABSTRACTConjugatedlinoleicacid(CLA)isa11octadeca-dienoicacid(18：2)withconjugateddoublebonds．

6、Ithasgainedconsiderableattentionbecauseofitsancarcinogenic，cholesterol—depression，andgrowth—promotingpropeaies．SometechniquestosynthesizeCLAbychemicalandbiologicalprocesseshavebeenproposedabroad，however，theyalestillverylittleinChina．Inthiswork，thebiologic

7、alsynthesisforCLAwasstudied，includingscreeningofpropionibacteriastrainproducingconjugatedlinoleicacid，thestudyonthetransformationandhi．ghcelldensitycultureofpropionibacteria,andthetransformationtechnicsofmixedmicroorganismandSOonSeveralpropionibacteriawer

8、eseparatedfromsilagesandcheeseThreestrains，whichareabletosynthesisCLAandproducepropionicacid，werescreenedOUtbyUVspectrophotometry，GCandHPLC．The浙江工商大学硕士研究生论文strainHz—·P--65withthehighestCLAproductivitywasselectedforf