版纳微型猪近交系asb17基因克隆及睾丸组织特异表达研究

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1、版纳微型猪近交系ASB17基因克隆及睾丸组织特异表达研究赵筱霍海龙范俐张霞刘丽仙王荣琼王世雄霍金龙云南农业职业技术学院云南省农业科学院粮食作物研究所云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南农业大学动物科学技术学院摘要：ASB17基因与睾丸形成和精子发生密切相关。为研究ASB17基因在猪睾丸功能及精子发生过程中的作用，本研究从GenBank下载猪及近缘物种ASB17序列作为参考序列，设计特异引物从版纳微型猪近交系（BMI）睾丸组织中扩增ASB17基因完全编码序列及部分侧翼序列，对ASB17翻译的蛋白质序列进行多种功能生物信息学分析并构建多物种系统进化树

2、，最后用实时荧光定量PCR技术检测BMI15个重要组织的ASB17mRNA转录表达水平。结果表明，扩增得到BMIASB17编码区序列长888bp,编码295个氨基酸。功能生物信息学分析表明ASB17存在2个保守结构域ANK和SOCSbox,无跨膜螺旋结构，无N端信号肽序列，二级结构以a螺旋为主，N末端和C末端均亲水，有4类功能活性位点，位于细胞质的概率70.6%。系统进化分析表明，ASB17基因在进化屮高度保守，且与牛、羊的亲缘关系最近，符合物种的系统分类学。多组织相对荧光定量表达分析表明ASB17基因在睾丸中特异高表达，在心、肝等其他14个组织中不表达。研

3、究结果为探索BMIASB17基因在睾丸形成和精子发牛过程中的作用及功能奠定基础。关键词：ANK（锚定蛋口重复）；SOCS（细胞因子信号抑制的蛋白）；版纳微型猪近交系;组织表达；作者简介：赵筱（1991-），女，云南省腾冲人，助教，主要从事动物分子遗传学研究.作者简介：霍海龙（1982-），男，博士，副教授，主要从事动物分子遗传学研究.作者简介：霍金龙(1975-)，男，博士，副教授，主要从事动物分子遗传学研究.E-mail:jinlonghuo973@163.com收稿日期:2017-04-15基金：云南省教育厅科学研究基金项目(2017ZZX099)Clo

4、ningofASB17geneandtestisspecificexpressioninBannamini-piginbredlineZHAOXiaoHUOHai-longFANLiZHANGXiaLIULi-xianWANGRong-qiongWANGShi-xiongHUOJin-longYunnanVocatiormlandTechnicalCollegeofAgriculture;InstituteofFoodCrops,YunnanAcademyofAgriculturalSciences;KeyLaboratoryofBrnmaMini-pigI

5、nbredLineofYunnanProvince,YunnanAgriculturalUniversity;Abstract：ASB17geneiscloselyrelatedtothetesticulardevelopmentandthespermatogenesis.TnordertostudytheroleofASB17geneinpigtestisfunctionandspermatogenesis,thespecificprimersweredesignedbasedonGncBankASB17mRNAsequencesofpigrclateds

6、pe-cies,andthecodingsequencesandflankingsequenceofASB17genewereamplifiedfromBannamini-piginbredline(BMI)testistissues.ASB17proteinsequencewasusedtocarryoutfunctionalbioinformaticsanalysisandconstructmultiplespeciesphylogenetictree.Real-timequantitativePCRwasappliedtoanalyzetheASB17

7、geneexpressionprofilesof15importanttissues.Theresultsobtainedan888bpcodingsequenceofBMIASB17gene,whichencodesaproteinof295aminoacids.FunctionalbioinformaticsanalysisindicatedthatASB17proteincontainedtwoconserveddomainsofANKandS0CSboxwithouttransmembraneregionandsignalpeptidesequenc

8、es.Itssecondarystructureis