宫颈癌tslp来源及其在营造癌灶微环境中的作用

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1、万方数据目录中文摘要1英文摘要5前言9第一部分TSLP对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用11第二部分宫颈癌细胞来源的TSLP在新生血管形成中的调节作用20第三部分宫颈癌细胞分泌的TSLP对癌灶内嗜酸性粒细胞功能的调控作用35结论59参考文献60致谢66附录附录1英文缩略语67附录2博士期间发表和待发表的论文69综述70文章78万方数据谢锋博士学位论文中文摘要宫颈癌TSLP来源及其在营造癌灶微环境中的作用博士研究生谢锋导师李大金教授导师组成员李明清助理研究员中文摘要宫颈癌，是一种妇科常见的恶性肿瘤，严重威胁妇女健康。但是至今为止，宫颈癌发病机制仍不完全

2、清楚。近年，肿瘤微环境的研究引起广泛高度重视，成为肿瘤生物学研究热点。肿瘤局部微环境中的血管生成和免疫细胞对宫颈癌进展发挥着不可或缺的调节作用。TSLP是一种造血细胞因子，参与调节多种生物学过程，如调节先天和获得性免疫反应，此外在过敏性皮肤病、呼吸道疾病、寄生虫感染和调节肠道免疫中具有重要作用。我们课题组前期工作发现人早孕期滋养细胞分泌的TSLP可以以剂量依赖的方式促进滋养细胞的增殖和侵袭力，并诱导母．胎界面Th2免疫优势。母胡台界面滋养细胞具有独特的类似于肿瘤细胞的生物学行为，即高增殖和侵袭能力。因此我们推测宫颈癌细胞可能通过分泌TSLP，以自分

3、泌和旁分泌作用参与营造宫颈癌微环境。阐明TSLP在宫颈癌发生发展中的调节作用将有助于阐明宫颈癌发病机制。本研究在前期工作基础上，探讨宫颈癌细胞是否通过分泌TSLP调节自身生长；进一步阐明宫颈癌细胞分泌的TSLP对癌灶新生血管形成的调节作用，及其对癌灶浸润的嗜酸性粒细胞功能的作用机制。第一部分TSLP对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用目的分析TSLP在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞生长的调节作用。方法收集人宫颈炎和宫颈癌组织，免疫组化分析各组TSLP的表达；ELISA检测宫颈癌细胞株(HeLa和CaSki细胞)不同时间点分泌的TSLP浓度；流式细胞术分

4、析HeLa和CaSki细胞表面TSLP受体的表达水平；MTT法分析不同浓度重组人TSLP对HeLa和CaSki细胞活力的调节作用：流式细胞术研究TSLP对HeLa和CaSki细胞增殖相关分子Ki．67表达的调节作用。结果与宫颈炎相比，宫颈癌组织高表达TSLP；宫颈癌细胞株Caski和Hela细胞均分泌TSLP，并呈现时间依赖性。此外，两种细胞均表达TSLPR，Caski万方数据谢锋博士学位论文中文摘要细胞表达TSLPR水平高于Hela细胞；TSLP处理CaSki和HeLa细胞48或72h后，能显著增强其细胞活力；重组人TSLP(NTSLP)均能促进

5、CaSki和HeLa细胞表达飚．67；抗人TSLP或TSLPR的中和性抗体下调Ki．67的表达。宫颈癌细胞通过分泌TSLP，以自分泌方式促进Ki．67表达，进而促进自身增殖，有利于肿瘤的生长和进展。结论宫颈癌细胞可表达TSLP，以自分泌方式上调飚．67表达，进而促进自身增殖，有利于肿瘤的生长和进展。第二部分宫颈癌细胞来源的TSLP在新生血管形成中的调节作用目的解析TSLP对血管内皮细胞的生物学功能的调节机制。方法收集人宫颈炎和宫颈癌组织，经胰酶消化后获得组织细胞悬液，流式细胞术分析各组血管内皮细胞及人脐静脉内皮细胞系(HUVECs)表面TSLPR的

6、表达水平；然后分别用不同浓度人NTSLP处理HUVECs，或者加入HeLa或CaSki细胞培养上清，同时加入抗人TSLP或TSLPR中和性抗体，然后应用BrdU增殖实验、AnnexinV-FITC／PI双染法和成管实验分别检测各组HUVECs的增殖、凋亡和成管能力；ELISA法检测各组HUVECs分泌的IL．6、IL．8和VEGF水平；流式细胞术分析HUVECs细胞活化相关分子的表达水平。结果宫颈癌组织中，TSLP(+)的血管内皮细胞比例为20．12％，明显高于宫颈炎组织中的比例5．37％；重组人TSLP处理72h后，可刺激HUVECs增殖。阻断T

7、SLP或TSLPR可显著抑制HeLa和CaSN细胞培养上清对HUVECs细胞增殖的促进效应；NTSLP上调HUVECs表达Ⅺ一67，阻断TSLP或TSLPR可显著降低与HeLa或CaSki细胞共培养的HUVECs表达Ki．67；TSLP对HUVECs表面凋亡相关分子(Fas和FasL)的表达无明显调节作用；rhTSLP显著增加CDl05的表达，但不改变CD62E的表达；然而阻断TSLP和TSLPR均可降调与HeLa或CaSki细胞共培养后的HUVECs细胞CDl05和CD62E的表达水平；rhTSLP增加HUVECs生成IL．6，而阻断TSLP或T

8、SLPR可减少HeLa细胞分泌IL．6、IL．8和VEGF，并下调CaSki细胞分泌IL．6的水平。NTSLP促进HUVE