谷胱甘肽转移酶及其抑制剂在宫颈癌化疗中的作用

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1、南方医科大学2006级硕士学位论文谷胱甘肽转移酶及其抑制剂在宫颈癌化疗中的作用RoleofGluthathionesS．Transferaseanditsinhibitorinchemotherapeuticresponseincervicalcancer．=占々学一指课题来源：自选课题业’名称‘位申请人导教师答辩委员会主席答辩委员会成员陈敦金教授张建平教授王子莲教授肖小敏教授陈春林教授论文评阅人王子莲教授钟梅教授全松教授2012年5月6日广州一i谷胱甘肽转移酶及其抑制剂在宫颈癌化疗中的作用博士研究生：黄神姣指导老师：余艳红教授M．JamesYou副

2、教授摘要背景与目的宫颈癌治疗根据患者的f靥床分期、年龄、一般情况、肿瘤相关因素等决定治疗方案【261。宫颈癌早期(I～IIA期)主要采用手术治疗，巨块型4cm的宫颈癌IB2及IIA期的患者术前采用新辅助化疗后手术，局部晚期宫颈癌(IIB~ⅢB期)目前采用放化疗同步治疗，晚期(iv期)多采用化疗加放疗【94'951。近年来，由●于联合化疗的进展，宫颈癌的化疗也从对晚期复发癌的姑息治疗变成宫颈癌综合治疗的重要组成部分。尤其是新辅助化疗因其能够缩小局部肿瘤体积、清除或抑制亚临床转移灶、提高后续治疗的效果，受到日益广泛的关注。然而，即使理想的手术、放疗、化疗

3、等多种方式联合治疗，III、IVA宫颈癌患者5年无病生存率不到一半。化疗药物耐药是中晚期宫颈癌治疗失败的主要原因。引起药物耐药的原因是多因素的，包括避免凋亡细胞死亡，改变多种药物耐药相关蛋白的表达，改变药物代谢或吸收，和／或谷胱甘肽转移酶过表达。谷胱甘肽转移酶(glutathiones-transferas，GSTs)是一个同源二聚体酶的超基因家族，为重要的II相代谢酶，其主要功能是催化谷胱甘肽和化疗药物、致癌物、环境污染物等一系列外来物结合，增加代谢产物水溶性，促进其排出，达到解毒功能。临床应用的许多抗癌药物，如顺铂、阿霉素、卡氮芥、丝裂霉素等都是

4、GSTs的底物。GSTs基因多态性可导致酶活性降低或丧失，从而增高宿中文摘要主对某些毒物和致癌物作用的敏感性，增加细胞毒作用。药理遗传学和基因组学研究表明，GSTs基因多态性与乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌的发生和化疗耐药相关。Townsend等的研究显示GSTs在肿瘤组织中高表达，导致肿瘤对多种化疗药物耐药，提示GST在原发及继发性耐药中发挥重要的作用。体外活体实验显示，化疗影响GSTsmRNA表达水平。Huang等的研究显示骨肉瘤细胞经DXR或顺铂(DDP)处理后，GSTPl表达上调。GSTPl过表达引起细胞对DXR和DDP耐药。GSTPl抑制引

5、起细胞凋亡和DNA损伤更明显【241。人胃肠道癌细胞暴露于5一FU或CDDP，引起TS、GST-pi和DPDmRNA的表达上调，上调程度与药物耐药相关【911。目前，对化疗对GSTmRNA表达的影响集中于GSTx，而对GSTTl、GSTMlmRNA表达的影响尚未见报道GSTs抑制剂已经形成，并用于调节GSTs高表达的实体肿瘤化疗耐药的调节。其中利尿酸(ethacrynicacid，EA)是GSTs抑制剂的重要代表药。至今为止，唯一的GSTs与宫颈癌化疗相关的报道是SohY等的研究。他们对12例宫颈癌和子宫内膜癌患者化疗前后GSTx表达进行了观察，尽管

6、他们的研究显示化疗后GSTx表达阳性与预后差相关，但由于样本例数过小而无统计学意义【65】。因此，GSTs基因多态性及化疗对GSTsmRNA表达的影响和GSTs及其抑制剂在宫颈癌化疗耐药中的作用尚不明确。本研究通过对宫颈癌细胞进行培养和GSTs基因分型，检测GSTsmRNA表达，使用化疗药物对细胞进行处理，观察化疗对GSTsmRNA表达的影响；同时采用化疗药物阿霉素(DⅫ)、长春新碱(VCR)和GSTs抑制剂EA对宫颈癌细胞进行处理，观察药物对细胞生长和存活，旨在分析GST基因多态性及化疗对GSTsmRNA表达的影响，和GSTs及其抑制剂在宫颈癌化疗

7、反应中的作用。材料和方法1．宫颈癌细胞培养Hela、Siha、C一33A为宫颈癌细胞，贴壁生长；Siha、C．33A培养于含II博士学位论文10％FBS、1％谷氨酞胺的DMEM培养基中；Hela培养于含10％FBS、1％谷氨酞胺的RPMI．1640培养基中；所有实验用细胞均于37"C、5％C02、湿度为95％培养箱中培养。2．细胞GSTs基因分型抽提细胞DNA，采用特异性引物进行PCR扩增分别识别GSTMl／GSTTl野生型和空白等位基因，获得GSTTl／GSTMl完整的基因分型(GSTTl／Ml+／+、十／-、．／-)；测序分析GSTPl基因序列，

8、使用SequenceScannerSoftwarev1．0分析序列图，确定GSTPl基因型(Ile105Il