谷胱甘肽转移酶在近江牡蛎耐受腹泻性贝毒中的作用研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：谷胱甘肽转移酶在近江牡蛎耐受腹泻性贝毒中的作用研究Theroleofglutathione-S-transferaseinresistancemechanismofCrassostreaariakensistodiarrheticshellfishpoisoningtoxins作者姓名：邹颖指导教师姓名：杨维东及学位、职称：博士教授学科、专业名称：生物学动物学学位类型：学术学位论文提交日期：2015年6月28日论文答辩日期：2015年6月4日答辩委员会主席：论文评阅人：学位授予单位和日期：暨南大学硕士学位论文摘要

2、谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-S-transferases,GST）是生物转化II相反应的重要酶，主要负责催化外源物质与还原性谷胱甘肽（GSH）形成亲水性共轭物，再由ABC转运蛋白（ATP-bindingcassettetransporter,ABC）泵出细胞外从而达到清除毒物和外源物质的目的，并在氧化应激过程中发挥重要作用。为揭示GST在贝体腹泻性贝毒（DSP）代谢解毒中的作用，本研究在实验室条件下，以利玛原甲藻（Prorocentrumlima）为DSP毒素的来源，通过实时荧光定量PCR（qPCR）分析了染毒后近江牡蛎（Crass

3、ostreaariakensi）鳃和消化腺组织中GST-α、GST-ζ、GST-ω、GST-π、GST-μ、GST-ρ、GST-θ和微粒体GST（microsomalGST）mRNA表达的变化，采用酶联免疫法（ELISA）测定了五种GST亚型蛋白水平的变化，并分析了贝类鳃和消化腺组织中总GST活性的变化。进一步利用GST特异性抑制剂依他尼酸（ethacrynicacid），观察了GST活性受到抑制时贝类鳃和消化腺组织中OA含量、P-gp和MRP外排活性的变化。5实验结果显示，在投喂2×10cells/L利玛原甲藻之后，鳃组织中GST-π、GST-μ、

4、GST-θ、GST-ζ和mGSTmRNA表达水平显著上升，消化腺组织中只有GST-α和GST-ζ表达受到诱导。与mRNA表达变化相类似，GST蛋白水平的变化也存在差异，当利玛5原甲藻密度为2×10cell/L的情况下，鳃组织中GST-θ和微粒体GST的蛋白含量显著5增加，当利玛原甲藻密度为20×10cell/L时，GST-π蛋白含量显著增加。鳃组织中GST活性显著提高，但消化腺中GST活性并无明显变化。这些结果提示GST可能参与DSP毒素的代谢解毒，不同GST亚型在耐受DSP毒素的过程中的作用可能不同。加入GST特异性抑制剂依他尼酸后，与未添加依他尼

5、酸的利玛原甲藻染毒组相比，鳃和消化腺组织中OA含量显著下降，P-gp和MRP外排活性显著提高，抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT的活性、丙二醛的水平并未发生明显变化，表明GST活性的抑制可改变DSP毒素在贝体中代谢过程，进一步说明GST在DSP毒素代谢解毒过程中发挥重要作用。关键词：近江牡蛎；谷胱甘肽-S-转移酶；腹泻性贝毒；OA；依他尼酸I暨南大学硕士学位论文AbstractGlutathione-S-transferases(GST)arephaseIIenzymesthatfacilitatethedetoxificationofxenobi

6、otics,whichcatalyticreducingglutathione(GSH)-xenobioticsconjugatecomplex,againtransportedbyATP-bindingcassettetransportersoastoachievetheaimofremovingpoisonandexogenoussubatances,atthesametimeGSTplayimportantrolesinantioxidantdefense.Here,toexploretherolesofGSTinresistantmechan

7、ismanddetoxificationofDSPtoxinsinshellfish,changesineightGSTsmRNAlevelincludingGST-α,GST-ζ,GST-ω,GST-π,GST-μ,GST-ρ,GST-θandmicrosomalGST(mGST)intheoysterCrassostreaariakensisafterexposuretoP.limawereevaluatedbyquantitativereal-timePCR(qPCR).SomeGSTsisoformscontentsandtotalGSTse

8、nzymeactivitiesweredetected.Additionally,theaccumulati