mirnas在胰腺癌相关性糖尿病中的表达及相关机制研究

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1、万方数据上海交通大学医学院博士研究生学位论文MiRNAsexpressioninPaC—associatedDMandrelatedmechanismresearch培养单位专业研究生指导教师申请学位关键词研究方向答辩日期上海交通大学医学院附属瑞金医院内科学(消化病学)戴欣袁耀宗教授博士(医学科学学位)胰腺癌相关性糖尿病，microRNA，胰岛B细胞损伤，NeuroDl胰腺癌相关性机制研究2013年4月万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不

2、包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：囊怠∥弋日期：叫；年I，月6日万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于

3、不保密武(请在以上方框内打“4”)未，、n袁¨，I。∥6：月名，≯签：币年删年教D导∞特鼽献j．：日奎6眷月作旷文年敝辟位圳学L期万方数据上海交通大学医学院博士学位论文miRNAs在胰腺癌相关性糖尿病中的表达及相关机制研究摘要背景：胰腺癌(pancreaticcancer，aac)发病隐匿，发现时多数患者都已近晚期，同时由于恶性程度较高，导致PaC预后极差，5年生存期<5％。因此，寻找新的PaC生物标志物已经成为极其紧迫和重要的任务。早在20世纪初期，人们就发现PaC与糖尿病(diabetesmellitus，DM)之间的关系，近年来多项大型临床流行病调查及

4、基础实验研究表明，部分病程小于3年，无明显代谢因素参与的新发DM可能是胰腺癌相关性糖尿病(pancreaticcancer-associatedDM，PaC．DM)，故对于PaC．DM的研究具有极其重要的临床意义。PaC．DM的发病机制目前还不清楚，在小PaC和PaC早期患者中DM与葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)障碍高发，同时往往会偏向一个体液过程而不是一个局部肿瘤效应，而胰岛D细胞易受到体液循环因素造成的损伤。目前，多项体外与人体研究表明PaC中胰岛素抵抗与胰岛13细胞损伤可能是由肿瘤分泌低分子量的蛋白质或者多肽引起的。因此我们推测胰岛p细胞是PaC．D

5、M发生发展中的主要目标。近年来，循环miRNA的发现为PaC的早期诊断提供了极大的契机，这种稳定存在于血清中的循环miRNA己被广泛研究证明可用于肿瘤等疾病的早期诊断、个体化治疗、预后判断等诸多方面。而血浆中的miRNA多数不是以游离形式存在的，绝大部分被包裹在微囊泡(microvesicle，MV)中，这些MV可以携带着miRNA进入靶细胞，改变靶细胞的生物学功能，这一现象为人们对研究PaC．DM发生发展的可能分子机制研究提供了全新的思路。目的：①筛选出PaC-DM患者特异血清miRNA表达谱，评价其对PaC-DM诊断价值。②研究胰腺癌细胞通过MV分泌的m

6、iRNAs对胰岛B细胞功能及凋亡的影响。③预测并验证在PaC．DM患者血清及MV中明显差异表达miRNA的靶基因。④动物实验研究，胰腺癌皮下移植瘤对植瘤小鼠糖代谢的影响，以及稳定上调明显差异表达的miRNA对植瘤小鼠胰岛B细胞功能的影响。万方数据上海交通大学医学院博士学位论文方法：①收集未经任何治疗的初入院PaC．DM患者血清，同时收集与患者年龄、性别匹配的单纯2型DM患者血清及正常对照，使用低密度芯片技术(TaqManLowdensityarray)、实时荧光定量PCR等实验技术筛选稳定变化的PaC．DM特异性血清miRNA表达谱。②利用差速离心和密度梯度

7、离心法，从患者血浆及体外培养细胞的培液上清中分离出微囊泡(microvesicle，MV)，检测MVs中富含miRNA，选定差异表达最明显的miRNA，采用过表达或干扰技术明显上调或下调该miRNA，检测其对胰岛B细胞生物学功能的影响。③根据多个权威生物信息学预测网站预测目标miRNA的靶基因，采用定量PCR及Westemblot实验进行验证。④构建SW1990细胞皮下移植瘤小鼠模型，通过糖耐量试验(IPGTT)及胰岛素耐量实验(ITT)检测胰腺癌皮下移植瘤对植瘤小鼠的糖代谢的影响，通过定量PCR检测小鼠血清中miRNAs的表达及Westemblot检测胰岛

8、细胞中靶基因的表达。结果：①通过低密度芯片技术及qR