蛋白质印迹磷酸海藻酸钙杂化微球的制备及特性研究

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1、摘要磷酸盐与海藻酸盐均为与自然界有着密切联系的物质。材料的杂化制备技术系采用同时能和多种物质反应的某种物质参加制备而得到一种具有多种成分并且至少两种成分之间存在化学结合作用的新材料。本论文采用反相悬浮交联法，制备了牛血清白蛋白(BSA)印迹的磷酸一海藻酸钙杂化微球，用电导率滴定、红外光谱等手段对产物结构进行了表征，用光学显微镜观察了微球的形貌，用紫外分光光度计对微球对模板蛋白质分子的吸附行为进行了研究，对印迹机理进行了初步分析，并研究了各种因素特别是环境pH值对凝胶微球吸附容量和印迹效率的影响。研究结果表明，反相悬浮交联法可以制备粒径在100．

2、4001an左右的凝胶微球；BSA与海藻酸钠从溶液中共沉积为固相时分子间产生组装作用。磷酸盐和海藻酸钠可以和CaCl2共同作用产生新的杂化组分；磷酸盐不仅起到增强微球的作用，还利于形成蛋白质的印迹位点以及起到致孔的作用，使得磷酸一海藻酸钙杂化微球对模板BSA的吸附容量和印迹效率高于海藻酸钙凝胶微球；印迹杂化微球比非印迹杂化微球表现出更高的吸附容量；制备、洗脱和吸附过程中的诸多因素，比如海藻酸钠溶液浓度、磷酸氢二铵加入量、模板蛋白质含量以及制备、洗脱和吸附环境的pH值等，对杂化微球的吸附容量和印迹效率有所影响：由此还进一步提出了软湿凝胶基材在对蛋

3、白质进行印迹和识别时，对应于制备、洗脱和吸附三个过程中的蛋白质与印迹基材在分子结构层次上的目标作用模式。关键词：蛋白质印迹磷酸．海藻酸钙杂化微球分子印迹海藻酸钙磷酸钙杂化凝胶牛血清白蛋白吸附容量印迹效率ABSTRACTPhosphatesandalginateshavecloserelationshipswiththenature．Thehybridpreparationtechniqueusesacertainmaterial．whichcanreactsconcurrently、而tIlmanykindsofcomponentsinvolv

4、edinthepreparation，toparticipatethereactiontoobtainanewcompositewithboththemaincomponentsabove．TheinteractionsbetweenatleasttWOcomponentsoftheproductarechemicallybonding．Inthisthesis，bovineserumalbumin(asA)imprintedcalciumalginate／phosphate(ca／p)hybridmicrosphereswereprepare

5、dbyphase-inversesuspensioncrosslinkingmethod．ThecomponentofproductwascharacterizedbyconductivitytitrationandFTLR；themorphologyofobtainedmicrosphereswasobservedbyopticalmicroscope；theadsorptionbehaviortotemplateproteinmoleculesofmicrosphereswasstudiedwiⅡlavisibleandultraviole

6、tspectrophotometer；theimprintingmechanismwasanalyzedtentatively；thefactorsaffectingadsorptioncapacityandimprintingefficiency,especiallytheenvironmentalpHvalue，werediscussed．Theresultsdemonstratedthatgelmicrosphereswitlldiameterof100—400prowereavailablebythisprocess．BSAmolecu

7、leshaveassemblyinteractionswithsodiumalginatewhenco-depositedtosolidphasefromsolution．Newhybridcomponentsappearedinthepresenceofphosphateandsodiumalginate．Beingreinforcementofthemicrospheres，phosphatesisalsofavortoproduceproteinbindingsitesandtooktheroleofpore-formation，whic

8、hresultedhigheradsorptioncapacityandimprintingefficiencyofcalciumalginate／p