丙型肝炎合并代谢综合征治疗策略及药物机制的研究

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1、北京协和医学院博士学位论文独创性声明l叭Y帆2帆311lll4㈣0洲6511119矾本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：走娄承签字日期：2。侈年岁月≥7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解j垦塞迹塑匡堂瞳有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并

2、向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权j＆塞迹塑匡堂院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：起龋签字日期：如骖年，月2—7日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：签字日期：电话：邮编：日北京协和医学院博士学位论文丙型肝炎合并代谢综合征的治疗策略及药物机制研究摘要丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的病毒性肝炎。在丙型肝炎患者中大约有一半以

3、上的患者合并有高血脂、高血糖等代谢综合征相关症状。HCV诱导患者出现胰岛素抵抗、高血脂、肝脏脂肪变性等代谢症状，而肥胖、胰岛素抵抗及肝脏脂肪变性等症状有助于HCV的复制，从而削弱抗病毒药物的治疗效果。抗丙型肝炎药物抑制HCV复制有助于调节代谢，而合并使用胰岛素增敏剂能提高抗丙型肝炎药物的治疗效果。针对丙型肝炎合并代谢综合征的患者，需要同时进行抗病毒和调节代谢治疗。因此本论文对抗病毒药物和调节代谢药物分别进行了机制研究。人类宿主细胞因子APOBEC3G(hA3G)是一种胞嘧啶核苷脱氨酶，其能够抑制包括人类免疫缺陷病毒1型

4、(HIV-1)在内的一系列病毒。在研究hA3G的过程中，发现有助于hA3G稳定的化合物显著抑制HCV的复制。由于HCV与HIV不同，为单股正链RNA病毒，属黄病毒科，这提示hA3G也可能是HCV复制的限制性因子。因此，本论文第一部分首先探索了hA3G在HCV复制中起到的作用。将外源性hA3G转染入感染了HCV的Huh7．5细胞，HCV的复制受到抑制；用RNAi下调内源性hA3G的表达导致HCV复制的增强。外源性HIV-1Vif蛋白能降低细胞内hA3G的水平，从而增强HCV增殖。这些结果提示，hA3G是HCV复制的限制性

5、因子。由于HIV-1编码的Vif蛋白能特异性地下调hA3G的含量，因此，Vif蛋白的存在，有助于HCV的复制，这可能是HIV-1阳性患者常常出现HIV-1／HCV合并感染的原因之一。用两个已知的可以提高hA3G稳定性的化合物RN．5或IMB．26处理HCV感染的Huh7．5细胞，细胞内hA3G的表达水平增加，相应的HCV复制受到抑制。这些化合物并不抑制HCV病毒酶，但却增加了进入HCV病毒颗粒中的hA3G的水平。但是，应用感染克隆测序并没有在新复制的HCV基因组里检测到G'-)A的高突变率，这表明hA3G对于HCV的抑

6、制作用是基于一个与抗HIV-l作用不同的新的抗病毒机制。进一步分析发现，hA3G和其稳定剂在HCV复制子系统中均对HCV的复制无影响，提示hA3G对HCV复制的限制作用可能发生在HCV复制周期的早期或晚期。稳定hA3G的小分子化合物RN．5即使在大剂量灌胃或腹腔注射处理小鼠后，没有观察到明显的毒副作用。上述所有结果说明hA3G是HCV复制的细胞内限制性因子并且可能成为药物靶点。盐酸小檗碱(Berberine，BBR)是一种从中草药中提取出的单体化合物(生物碱)。其多年来被用于控制2型糖尿病患者的血糖水平。在人体和动物模

7、型中，北京协和医学院博士学位论文BBR都能够起到改善肥胖，控制血糖、血脂和肝脏脂肪变性的作用，但是其机制仍然不明确。因此本论文第二部分重在研究BBR改善代谢的机制。本研究，证实BBR在食源性肥胖模型(DIO)小鼠中增加能量消耗。给予小鼠含BBR的食物，小鼠的氧耗量和二氧化碳的产生增加，而其运动量和食物摄入量没有变化。经过BBR治疗，小鼠的体重增长下降，肝脏脂肪变性改善，血脂下降，由高脂饲料(HFD)引起的胰岛素抵抗也得到改善。在肝脏里，BBR增加SIRTl(Sirtuin1)的蛋白表达和SIRTl蛋白丝氨酸46位(Se

8、r46)的磷酸化、升高氧化型和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+／NADH)的比率，同时下调C．Jun氨基末端激酶1(JNKl)的活性。在小鼠的肝脏细胞(1clc7)中，BBR的处理可以时间依赖性地增加SIRTl的蛋白表达和NAD+的水平，降低JNK的活性。在BBR的处理下SIRTl的酶活性提高。在BBR喂养的小鼠中，硬酯酰辅酶