肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究

《肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第34卷第4期云南中医学院学报Vol．34No．42011年8月JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine8．2011*肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究12△2谭从娥，王米渠，陆明(1．陕西中医学院，陕西咸阳712046;2．成都中医药大学，四川成都610075)［摘要］目的:探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制，为其疗效提供科学依据。方法:根据肾阳虚证评定量表，选

2、取典型肾阳虚证患者10名给予温针治疗两周，然后以其中疗效最好的4例治疗前后作基因芯片杂交测试，采用SAM基因芯片数据分析软件，筛选显著表达基因作进一步的基因功能分析。结果:4例患者皆为典型肾阳虚证，经温针治疗后效果明显。通过SAM软件筛选到32个显著表达基因，基因功能注释结果提示炎症反应、信号转导类基因显著表达;分子通路主要集中于免疫及信号转导通路。讨论:温针治疗肾阳虚证膝骨关节炎的疗效的分子机制是多方面的，涉及到炎症反应、免疫功能、信号系统等多方面的修复作用。［关键词］肾阳虚证;骨关节炎;温针;差异基因表达谱中图分类号:R241文献

3、标志码:A文章编号:1000—2723(2011)04—0004—03肾阳，又称命门之火，为人体阳气之根本，肾三里(双)、膝眼(双)、阳陵泉(双)。选用华阳虚的程度与疾病的发生发展有着密切的联系，加佗牌针具针刺穴位，行针得气后留针，将华佗牌艾之久病及肾，故肾阳虚证在临床上极为常见。肾主条切成2cm1个，置于针柄上行温针灸，每次2壮骨生髓，中医肾的概念与骨关节炎发病理论上有着约40min。每日1次，共治疗14次。密切的关系。因此，本文借助中西医病证结合的方1.3芯片实验法，选取中医证为典型的肾阳虚证，西医诊断为单4例患者分别于治疗前、后

4、采血10mL，分离纯膝骨关节炎的患者作为研究对象给予温针治疗。获得白细胞，用TRIzol一步法提取细胞中的总选择其中疗效最佳的病例，治疗前后对照作基因芯RNA，通过异丙醇沉淀法浓缩RNA，使用10μg治片，对治疗前后的差异表达基因进行基因功能注疗前后的实验样品的RNA反转录为cDNA。采用释，为温针分子疗效评定奠定基础。北京博奥生物芯片有限公司制备的cDNA人类全基1资料与方法因组表达谱芯片，将治疗前后的样品分别用cy3和1.1研究对象cy5标记，标记后的样品同时与芯片上的21329克在中国四川省彭州市大保乡山区作肾阳虚证调隆点进行杂

5、交，芯片用ScanArray急速的双通道激查过程中，根据自编的40项肾阳虚辨证因子量光扫描仪进行扫描。再采用GenePix4.0图像分析［1，2］表为评分细则进行评分，选取年龄为40岁以软件对芯片图像进行分析，把图像信号转化为数字上，男女比例相近的典型肾阳虚证患者10名，符信号;然后对芯片上的数据用Lowess方法进行归合1991年美国风湿病学会推荐的膝骨关节炎诊断一化，最后ratio值为治疗后/治疗前。差异基因筛［3］标准，给予温针治疗，然后以其中疗效最好的4选标准采用倍数分析的方法，即以ratio＞或=2为例于温针治疗前后采血对照

6、作基因芯片。上调基因，ratio＜或=0.5为下调基因。1.2温针治疗方案1.4基因芯片数据分析对上述10例肾阳虚证患者取关元、气海、足采用SAM(SignificantAnalysisofMicroarray)*基金项目:国家自然科学基金资助项目(NO:81072731)收稿日期:2011—07—13作者简介:谭从娥(1972～)，女，陕西柞水人，讲师，博士。研究方向:证的分子调控机制研究。△通讯作者:王米渠，E－mail:miquwang@163.com。4第4期谭从娥，等:肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究芯片数据分析

7、软件分析家系差异表达基因。SAM2.2基因芯片检测结果是由Standford大学开发的一个微阵列显著性分析2.2.1显著表达基因筛选软件，目前已广泛被学术界所采用。SAM采用基4例患者温针治疗前后样品杂交，基因芯片数因特异性t检验，通过控制假阳性率(FalseDis-据处理得到4组基因表达数据。将4组基因表达信［4，5］coveryRate，FDR)来筛选统计显著性基因。号值输入SAM分析软件，取FDR为非0最小值时对于大多数的基因芯片分析，通常要求FDR很小，的基因数目为入选基因，当Delta=0.70，FDR=这样才能保证较少的假

8、阳性基因通过检验。但是如0.15时共筛选到特征表达基因32个，其中上调基果FDR取值为0，则可能会有较多的假阴性错误，因4个，下调基因28个。SAM输出散点图见图1，所以本文中FDR取一定Delta值控制下的非0最小红色