血瘀证患者差异基因表达谱研究

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1、血瘀证患者差异基因表达谱研究作者：马晓娟,殷惠军,陈可冀【摘要】目的：应用寡核苷酸基因芯片技术，研究血瘀证患者差异基因表达谱。方法：16例血瘀证患者经冠状动脉造影诊断后，分为冠心病血瘀证组和非冠心病血瘀证组，每组8例；并选年龄和性别相匹配的8名健康人为健康对照组。抽取静脉血，分离白细胞，抽提RNA，质控芯片（Test3芯片）对样本质量进行检测，然后与AffymetrixU133Plus2.0芯片进行杂交，通过扫描和软件分析，比较冠心病血瘀证组、非冠心病血瘀证组与健康对照组的基因表达谱，筛选血瘀证相关差异基因，并进一步进行基因本体（GeneOntolog

2、y,GO）和通路分析，使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法对目标基因进行验证。结果：通过差异基因筛选，与血瘀证相关的差异基因共有48个，其中上调基因26个，下调基因22个；通过GO分析，其中与炎症免疫相关的基因有5个，占10.4%；通路分析结果显示，有意义的10条通路中有5个涉及炎症和免疫反应。经实时荧光定量逆转录聚合酶链反应验证了基因芯片准确可靠。结论：血瘀证基因表达谱研究显示了炎症和免疫相关基因的比例和显著性优势，说明炎症和免疫反应在一定程度上介导了血瘀证的发生发展。【关键词】血瘀证;基因表达谱;炎症;免疫反应　　Objective:Toinves

3、tigatethedifferentialgeneexpressionprofilesinpatientsebyoligonucleotidemicroarraytechnique.Methods:SixteenpatientseatchedEighthealthypersonsployedtoexaminethequalityofsamples.ThenthesamplesetrixU133Plus2.0arraytoparethegeneexpressionprofilesamongthethreegroups.Genearrayscannera

4、ndgenechipoperatingsoftples,thedifferentialgenesrelatedeedbyrealtimereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).Results:FortyEIghtdifferentialgenese,including26upregulatedgenesand22domatoryreactionandimmuneresponsethroughtheGOanalysis.Inthepathmationandimmuneresponse.

5、TheresultsofrealtimeRTPCRprovedtheaccuracyofthegenechip.Conclusion:Inflammatoryandimmunerelatedgeneshavearemarkablepredominanceinbloodstasissyndromegeneexpressionprofiles,ayexplainthefunctionofinflammationandimmuneresponseintheoccurrenceanddevelopmentofbloodstasissyndrome.　　

6、Keye;geneexpressionprofiling;inflammation;immuneresponse关于瘀血，早在《内经》中就有“恶血”、“留血”、“血凝泣”的记载，现代研究认为，瘀血可分为瘀滞内结之血、离经之血和污秽之血，而污秽之血按其来源又可分为外源性（是指生物性致病因素和理化因素所致）、内源性（是由于重要脏器衰竭引起自身代谢产物的堆积）和复合性（是指外源性与内源性因素并存）［1］，可见瘀血作为一种病因和病理产物有其发生和存在的物质基础，而近年关于瘀血的基础研究主要集中在炎症、免疫、血流动力学、血小板功能和微循环等方面。血瘀证可见于多种

7、疾病，是一种综合性病理状态，形成机制非常复杂，虽然形成过程不尽相同，但却存在着共同的病理特点。近年血瘀证客观化研究发现，不同疾病过程中血瘀证的相关指标也存在一定程度上类似的变化趋势，这种相似性说明不同疾病血瘀证必然存在着共同的物质基础。本研究应用高通量的寡核苷酸芯片技术，在全基因组水平对冠心病（coronaryheartdisease,CAD）血瘀证患者、非冠心病血瘀证患者和健康对照者的基因表达谱进行检测，构建血瘀证差异基因表达谱，旨在揭示与血瘀证发生发展相关的病理机制，为证的实质研究奠定一定分子生物学基础。　　1资料与方法　　1.1临床资料　　16例

8、实验组病例均来源于北京西苑医院门诊及住院病人，分为冠心病血瘀证组（8例）和非冠心病血瘀证组（8