ho1对食管鳞癌eca109细胞vegf表达及氟尿嘧啶化疗敏感性影响

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文目录一、英文缩略词袁⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··3二、论文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．·7三、论文正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．11材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯--25分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··35，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43六、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．502万方数据温州医科大学硕士学位论文siRNA5一FUHO一1IC50MTTFBSODPBSRT-PCRSDSMDR缩写词表RNAInterference小干扰RNAFluorouracil氟尿嘧啶heineoxygenas

3、e·l血红素加氧酶．1InhibitoryConcentration50％半数细胞抑制浓度MethylTetrazolium四甲基偶氮唑蓝FetalBovineSerum胎牛血清0PtiCalDensitY吸光度PhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液ReverseTranscriptionalPolymeraseChainReaction逆转录聚合酶链反应SodiumDodecylSulfate十二烷基磺酸钠Multidrugresistance多耐药基因3万方数据温州医科大学硕士

4、学位论文HO-1对食管鳞癌Ecal09细胞VEGF表达及氟尿嘧啶化疗敏感性的影响中文摘要研究背景及目的：我国是食管癌高发区，多数食管癌患者就诊时已属中晚期，因此预后较差，化疗是食管癌综合治疗的有效手段。血红素加氧酶l(hemcoxygenase，HO．1)是体内降解血红素重要的限速酶，与肿瘤增殖、凋亡、血管发生等生物学行为关系密切【J]。我们的前期研究表明HO．1在食管癌中高表达，并与肿瘤分化、食浸润程度、淋巴结转移显著相判2

5、。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfa

6、ctor，VEGF)是较为公认的血管生成因子之一，既往大量体内和体外的研究发现，HO．1能促进VEGF等血管生成因子的表达，对肿瘤新生血管的生成起着重要的作用【31。本研究分别通过氯化高铁血红素(Hemin)诱导及RNA干扰HO．1基因的表达，观察食管鳞癌Ecal09细胞VEGF的表达及对氟尿嘧啶化疗敏感性的影响，为HO一1可能作为食管癌等恶性肿瘤的基因治疗靶点提供理论依据。方法：利用荧光标记的siRNA摸索最佳转染条件，应用氯化高铁血红素(Hemin)及体外设计合成的靶向抑制HO—l的小分子RNA(

7、siRNA)分别诱导和沉默食管鳞癌Ecal09细胞HO．1基因的表达，采用RT-PCR、Westernblot检测HO．1mRNA和蛋白表达水平。将实验分为Hemin(101tM)处理组、HO-1siRNA+Hemin(10l_tM)组、HO一1siRNA组、空白对照组，分别以Westernblot和ELASA法检测各组细胞VEGF的表达；应用MTS法、流式细胞仪检测干预后Ecal09细胞对氟尿嘧啶敏感性的变化。结果：1．利用荧光标记的siRNA摸索最佳转染条件经优化试验后确定最佳转染条件为：传代细胞

8、数量2X105、脂质体7．5ul、siRNA(20pmol／L)5ul、siRNA转染终浓度100nmol／L，在荧光显微镜下可观察到：脂质体介导下转染的细胞内可见到明显的红色荧光，荧光标记主要定位于胞浆或胞核中，cy3．siRNA在Ecal09细胞中转染效率大于90％，流式细胞仪检测结果4万方数据温州医科大学硕士学位论文显示该条件下cy3一siRNA在Ecal09细胞中转染效率为(95．94±3．13)％，并且转染后Cy3荧光能持续可见72h。2．筛选干扰效果较好的HO．1siRNA分别将HO一1s

9、iRNAl和HO一1siRNA2按上述转染条件转染Ecal09细胞，24h后利用RT-PCR法比较HO一1mRNA表达水平，结果显示：HO—lsiRNAl和HO—lsiRNA2均可有效抑制HO—lmRNA的表达，与空白对照组相比，HO．1mRNA表达水平分别降低(88．92±3-21)％、(78．74±2．11)％，HO．1siRNAl较HO．1siRNA2干扰效果更好(p