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1、沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因表达的影响王涛1,轩小燕2,臧文巧2,李敏2(1河南中医学院第一附属医院血液肿瘤科,河南郑州450000;2郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,河南郑州450052)王涛,硕士,主治医师,主要研究方向:食管癌的浸润转移。Tel:13603860857.Email:wang37127070@tom.com通讯作者:李敏,副教授,zangwenqiao@sina.com电话:13603860857摘要:目的:探讨沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因表达的
2、影响,初步阐明CXCR4在食管鳞癌细胞系EC9706浸润转移中的作用机制。方法:利用RT-PCR检测转染有两对CXCR4siRNA的食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因mRNA的表达,WesternBlot和免疫细胞化学技术检测转染有两对CXCR4siRNA的食管鳞癌EC9706细胞中VEGF基因蛋白的表达,同时以未转染细胞和转染阴性siRNA细胞作为空白对照和阴性对照。结果:转染两对CXCR4siRNA后48h,RT-PCR结果显示,转染组VEGFmRNA的表达较未转染空白对照组和转染阴性对照siRNA组相比明显下降,差异具有统计
3、学意义(P<0.05);WesternBlot结果显示CXCR4siRNA转染后48h,CXCR4siRNA不仅能抑制VEGFmRNA的表达,对VEGF蛋白的表达同样有明显的抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫细胞化学技术检测结果进一步证实,与未转染空白对照组和转染阴性对照siRNA组相比CXCRsiRNA对VEGF蛋白表达的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性阻断CXCR4基因的表达可以抑制VEGF基因的表达,说明CXCR4基因有可能通过调控VEGF的表达参与食管鳞癌的浸润转移,CXCR4有望成为肿
4、瘤基因治疗的新靶点.关键词:食管鳞癌,CXC族趋化因子受体4,血管内皮生长因子,基因调控,浸润转移EffectofsilencingCXCR4ontheexpressionofVEGFinEC9706WangTao,XuanXiaoyan,ZangWenqiao,LiMin,1DepartmentofHemato-tumor,TheFirstAffiliatedHospitalCollegeOfTCMofHenan,Zhengzhou450000,2DepartmentofMicrobiologyandImmunology,Medic
5、alcollegeofBasicScience,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052AbstractAIM:ToexploretheEffectofsilencingCXCR4ontheexpressionofVEGFinEC9706andtoinitiallyexplorethemechanismofCXCR4ontheinvasioncapabilityofEsophagealcarcinomacelllineEC9706invitro.METHODS:RT-PCRwereusedtoanalyz
6、etheVEGFmRNAexpressioninEC9706cellswhichtransfectedwithtwoCXCR4siRNA48h,EC9706cellsandEC9706cellstransfectedwithnegativesiRNAwereusedascontrol.WesternBlotandImmunocytochemistrywereusedtoanalyzetheVEGFproteinexpressioninEC9706cellswhichtransfectedwithtwoCXCR4siRNA,EC9706
7、cellsandEC9706cellstransfectedwithnegativesiRNAwerealsousedascontrol.RESULTS:AftertransfectedwithtwoCXCR4siRNAfor48h,TheresultsofRT-PCRshowedthattheexpressionofVEGFmRNAweredecreasedgreatlythanthoseinthenegativecontrolandblankcontrol,andthedifferenceswerestatisticallysig
8、nificant(P<0.05).TheresultsofWesternBlotshowedthatCXCR4siRNAcouldnotonlydecreasetheexpressionofVEGFmRNAbutalso