uch-l3与lc3在急性髓系白血病中的表达与作用-研究

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1、万方数据目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5一(一)刚吾⋯⋯⋯“⋯’⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯。”⋯⋯⋯⋯‘(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2标本来源⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7

2、1．3主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．4主要器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5主要试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O2．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．2RealTimePCR法检测TCID处理HL．60细胞前后LC3和UCH-L3的mRNA表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·102．3WestemBlot方法检测TCID处理HL．60细胞前后LC3和UCH．万方数据L3的蛋白表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯OO

3、O⋯132．4外周血单个核细胞提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·172．5RealTimePCR法检测外周血单个核细胞LC3和UCH．L3的mRNA表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯··⋯⋯⋯⋯⋯··17(三)实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．UCH．L3抑制剂TCID处理HL．60细胞前后LC3和UCH-L3mRNA的表达变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．UCH．L3抑制剂TCID处理HL．60细胞前后LC3和UCH．L3蛋白的表达变化⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯193．UCH．L3及LC3在临床样本中的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯_⋯⋯20(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯00O00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000··0⋯⋯24(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯40万方数据大连医科大学硕士学位论文UCH．L3与LC3在急性髓系白血病中的表达及作用的研究硕士生姓名：胡丹指导教师：袁宏教授指导小组：赵婧媛讲师专业名称：临床检验诊断学摘要目的：急性髓系白血病(AML)是一种常见的血液恶性肿瘤，研究表明自噬与AML的发生发展密切相关，但具体机制尚未明了。越来越多的报道证明，自噬和泛素蛋白酶体系统(UPS)之间存在着活跃的联系。我们前期的蛋白质组学研究发现，使用雷帕霉素处理AML细胞后，AML细胞发生自噬性死亡，而去泛素化酶家族成员泛素羧基末端水解酶L3(UbiquitinC-terminalHydrolaseL3，UCH-L3

6、)在自噬性死亡过程中表达上调，为了探讨UCH．L3与自噬在AML发生发展过程中的作甩和相互关系，本研究在前期工作基础上，使用UCH．L3抑制剂TCID处理急性髓系白血病细胞HL．60，观察自噬的标志性基因LC3在基因和蛋白水平上的表达变化，并进一步通过临床AML患者的外周血样本分析研究UCH．L3和LC3基因的表达情况，进而为探讨自噬与UPS在白血病中的作用机制奠定基础，最终为白血病的诊断及治疗提供新的靶点和策略。方法：1．UCH．L3抑制剂TCID100nmol／L处理HL．60细胞，RealTimePCR法检测UCH．L3抑制剂TCID处理HL．60细胞前后UCH．

7、L3和LC3的mRNA表达变化。2．WesternBlot方法检测UCH．L3抑制剂TCID处理HL．60细胞前后】万方数据大连医科大学硕士学位论文UCH．L3和LC3蛋白水平的变化。3．RealTimePCR方法检测健康组、AML初发组、AML缓解组及AML难治组外周血单个核细胞UCH．L3和LC3mRNA的表达情况。4．追踪同一患者治疗前后UCH．L3及LC3mRNA的表达变化。结果：1．利用RealTimePCR及WesternBlot方法，检测经UCH．L3抑制剂TCID处理HL．60细胞后UCH．L3和LC3在基因和蛋白水平上表