mdm4s在急性髓系白血病中的表达及其在复杂核型形成中的作用

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1、分类号：320.2430学校代码：10114密级：学号：Dr2009022MDM4S在急性髓系白血病中的表达及其在复杂核型形成中的作用ExpressionofMDM4SinAcuteMyeloidLeukemiaanditsContributiontoComplexKaryotypeFormation研究生：李莉指导教师：王宏伟教授专业名称：内科学研究方向：血液病分子生物学所在学院：山西医科大学第二临床医学院中国山西二〇一三年五月二十日目录中文摘要…………………………………………………………………………….1英文摘要………………

2、…………………………………………………………….6第一部分伴复杂核型初发急性髓系白血病患者临床及细胞遗传学特征分析前言………………………………….………………………………….….13研究对象和方法…………………………………………………………….14结果……………………………………………………………………………18讨论…………………………………………………………………………..22第二部分初发急性髓系白血病相关基因突变及MDM4-S/MDM4-FL的表达分析前言…………………………………………………………………………..24研究对

3、象和方法……………………………………………………………..26结果…………………………………………………………………………..36讨论…………………………………………………………………………..43第三部分MDM2、MDM4-S慢病毒载体的构建与感染前言…………………………………………………………………………..46材料和方法…………………………………………………………………..47结果…………………………………………………………………………..56讨论…………………………………………………………………………..58第四部分MD

4、M4-S高表达在复杂核型形成中的作用前言…………………………………………………………………………..60材料和方法……………………………………………………………………62结果……………………………………………………………………………74讨论…………………………………………………………………………..80结论…………………………………………………………………………………83参考文献……………………………………………………………………………84综述正文…………………………………………………………………………….91参考文献……………

5、….…………………………………………………….100附录中英文缩略词..…………………………………………………………….110攻读学位期间发表文章情况…………………………………………………….111致谢……………………………………………………………………………..112个人简历………………………………………………………………………….113山西医科大学博士学位论文MDM4S在急性髓系白血病中的表达及其在复杂核型形成中的作用摘要目的伴复杂核型急性髓系白血病（acutemyeloidleukemiawithcomplexkaryot

6、ype,CK-AML）大约占成人AML的10%～15%，并且随着年龄的增长，发生率增加。复杂核型是AML独立的预后不良因素，临床化疗缓解率低，预后差，缺乏有效的化疗方案。研究复杂核型形成机制有望找到有效的治疗靶点，改善患者预后。本研究通过核型分析筛选初发急性髓系白血病伴复杂核型患者，从P53抑制因子鼠双微体基因4（mousedoubleminute4，MDM4）及其短剪接体(shortisoformofMDM4,MDM4-S)与复杂核型形成关系入手，检测CK-AML与正常核型AML患者MDM4及MDM4-S的表达水平，并构建MD

7、M4S慢病毒载体，感染表达野生型P53的HepG2细胞株，观察细胞周期、细胞增殖、P53通路相关蛋白和纺锤体检查点相关蛋白表达的变化，从而在细胞和分子水平探讨复杂核型形成的可能机制。方法1.采用G/R显带核型分析筛选具有复杂核型的初发AML患者总结患者特征和预后，对140例初发AML患者进行G/R显带核型分析，具有3种或3种以上的染色体异常者，即确定为伴有复杂核型的AML患者。2.采用PCR、RT-PCR及实时定量RT-PCR检测相关基因突变及MDM4FL、MDM4S的表达提取140例初发AML患者骨髓样本的DNA及总RNA，通

8、过PCR、RT-PCR及实时定量RT-PCR方法检测TP53、FLT3-ITD、AML1基因突变、MDM2、MDM4及其剪接体MDM4-S的表达水平等，分析各种相关基因的突变及1山西医科大学博士学位论文MDM4-S/MDM4-FL比值的变化。3.构建MDM2、M