染料木黄酮联合吉非替尼抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌分子机制的的研究

《染料木黄酮联合吉非替尼抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌分子机制的的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要同药物的联用方案。而后者实施起来更为高效、快捷。一些黄酮、多酚类低毒或无毒的植物提取物的抗肿瘤效应引起了科学家的重视。因此，将常规抗癌药物与植物类化合物有效地相结合，能降低药物给药剂量，一方面减少抗癌药物对机体产生的毒副作用，另一方面也提高了抗癌药物的生物学活性，这对提高患者的生存质量尤为迫切和需要。4，5，7．三羟基异黄酮(Genistein)是一种天然的酪氨酸蛋白激酶抑制剂，其抗癌作用近年来倍受关注。Genistein可作用于EGFR介导的细胞信号传导通路的多个节点蛋白，在不同水平发挥酪氨酸激酶抑制作用。其多靶点的TKI活性为设计新的

2、靶向治疗联用方案，打开了一扇大门。一定剂量的Genistein既能诱导肿瘤细胞分化又具有凋亡的作用，但单独使用Genistein对肿瘤细胞的诱导分化和促凋亡作用均较弱。因此，研究如何既能减低抗肿瘤药物剂量、减轻其毒副作用，又能增强或不减弱药物的抗肿瘤效果就显得尤为重要。有学者就认为探索低剂量多药联合应用，是肿瘤药物治疗研究的一个十分重要的方向。研究目的：本课题拟通过比较Gefitinib或Genistein单药与两者联合使用对H1975人肺癌细胞株增殖、凋亡及相关蛋白PARP和caspase．3表达的影响，以及EGFR、Akt、Erkl／2和mT

3、OR信号传导通路中的关键蛋白的磷酸化水平，从分子水平验证联合用药较之单独用药是否存在增强药物抗肿瘤效果。在此基础上通过裸鼠成瘤实验从体内、体外水平共同探索EGFR信号传导通路与药物抗肿瘤活性关联的分子机制。研究结果将有助于为“膳食植物素结合靶向治疗或化学预防来抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌"提供新的理论依据。材料与方法：整个实验分为两部分。Ⅱ博士学位论文第一章：染料木黄酮联合吉非替尼抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌分子机制的研究本研究拟选择EGFR突变型肺癌细胞株，研究比较吉非替尼或／和染料木黄酮三种不同用药方式的细胞毒作用及其机制，为“膳食植物素

4、结合靶向治疗或化学预防来抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌"提供理论依据。选择EGFR耐药突变肺癌细胞株H1975，H1975细胞含有EGFR20外显子T790M突变和2l外显子L858R突变，对EGFR-TKI耐药。通过单独使用不同剂量Gefitinib或Genistein及两者联合处理H1975人肺癌细胞株，动态观察H1975细胞生长情况，采用MTT法检测各组细胞增殖抑制情况；采用Chou-Talalay方程计算CI值(协同指数)；流式细胞仪进行凋亡率检测；Westernblotting法检测凋亡相关基因PARP和easpase．3蛋白表达情况及

5、EGFR、Erk、Ala、mTOR蛋白磷酸化水平，分析Gefitinib联合Genistein能否协同增强抗肿瘤效应。第二章：染料木黄酮联合吉非替尼对获得性耐药突变非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制使用BALB／e遗传背景的雌性裸鼠作为实验动物，6～8周龄，SPF级饲养。人肺腺癌细胞株H1975用含有15％dx牛血清RPMI1640在37"C、5％C02条件下培养。于每只裸鼠背部皮下注射4X106个细胞，建立获得性耐药非小细胞肺癌裸鼠皮下移植瘤模型。移植瘤体积达到～100删n3时，采用随机数字法将40只裸鼠随机分成4组，每组10只进行实验：

6、(1)5％吐温80溶液对照组；(2)150mg／kgGenistein组；(3)50mg／kgGefitinib组；(4)Genistein150mg／kg+Gefitinib50mg／kg两药联用组。5周末，将所有存活裸鼠麻醉后处死，摘除裸鼠移植瘤，测量肿瘤体积，计算协同指数q值和抑瘤率，10％中性甲醛溶液固定瘤体。用免疫组化SP法进行原位细胞增殖分析，计算增殖指数；用TUNEL法进行原位细胞凋亡分析，计算细胞凋亡指数。m中文摘要结果：第一章：染料木黄酮联合吉非替尼抑制获得性耐药突变非小细胞肺癌分子机制的研究1．Gefitinib联合Oenis

7、tein对H1975细胞的生长抑制作用在分别给予H1975细胞Genistein单药48h，Gefitinib单药48h，以及Genistein与Gefitinib同时处理细胞48h后，我们观察到Genistein、Gefitinib单药以及Oenistein+Gefitinib联合用药产生了不同的抗增殖效果。各处理组随药物浓度增加，抑制效应逐渐增强，其中Oenistein+Gefitinib联合用药组抑制效应最为明显。两者联合用药对H1975细胞的增殖抑制作用强于Genistein、Oefitinib单药组，协同增效作用明显，镜下观察细胞数明显

8、减少。One．wayANOVA检验分析结果显示，Genistein+Oefitinib两药联用对细胞的抗增殖效应优于Oefitinib单