甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定

甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定

ID:32294636

大小:8.96 MB

页数:91页

时间:2019-02-02

甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定_第1页
甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定_第2页
甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定_第3页
甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定_第4页
甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定_第5页
资源描述:

《甲基苯丙胺对pc12细胞毒性损伤的研究与相关差异蛋白质的筛选与鉴定》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、硕士学位论文甲基苯丙胺对PCI2细胞毒性损伤的研究及相关差异蛋白质的筛选与鉴定硕士研究生:李丽增导师:王慧君教授摘要研究背景甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)属于苯丙胺类神经兴奋剂(Amphetamine.TypedStimulant,ATS),其盐酸盐为透明的结晶体,状如冰,俗称“冰毒”,为一种新型毒品,号称“毒品之王’’。因其具有见效快,兴奋作用维持时间长,价格低廉,化学合成技术简单,多途径摄取等特点,使它滥用和蔓延速度极快。因其具有中枢神经兴奋性、致幻、食欲抑制和拟交感能效应等药理、毒理学特性,最初作为抗疲劳剂、减肥药使用。随后发现其具有精神依赖

2、性。现已被列为联合国精神药品公约管制的精神活性物质。研究证明,METH可导致行为学改变,对心、肝、肾和骨骼肌等组织器官均有毒性作用,但更主要的是其对中枢神经系统的毒性,尤其是多巴胺能系统。METH可导致大脑黑质、纹状体、海马、皮质等多部位损伤,包括神经细胞凋亡、多巴胺耗竭、多巴胺能神经末梢损害、多巴胺转运体(DAT)减少和酪氨酸羟化酶活性下降。研究显示METH可导致体外培养的神经细胞凋亡,表现为细胞核染色质凝集、核碎裂和阶梯状DNA碎片形成。METH的毒性损伤作用是一个复杂过程,目前认为METH毒性损伤所致的过量多巴胺的氧化、谷氨酸介导的兴奋性作用、线粒体功能紊乱、神经元

3、凋亡、细胞稳态改变及神经退行性变是METH导致中枢神经损伤的可能机制,但目前国内外的研究结果尚不足以完全阐明确切METH的神经毒性机制。中文摘要目的我们前一阶段的体内实验研究结果显示METH引起大鼠脑组织多部位神经毒性损伤,多巴胺及代谢产物的耗竭,纹状体NOS活性升高,NO含量提高,小胶质细胞激活等。运用蛋白质组学的方法,对METH注射后大鼠纹状体、皮质、海马等部位部位的差异表达蛋白质进行鉴定和分析,寻找和鉴定出30个差异表达蛋白点,3个NO相关蛋白即硝化蛋白。分析认为氧化应激、能量代谢障碍、蛋白酶体功能失调、凋亡及重要结构蛋白的硝化等可能是METH神经毒性的主要机制。为

4、了更好更深入的研究METH的神经毒性机制,本次研究采用多巴胺能神经元体外模型PCI2细胞系进行体外实验。PCI2细胞在神经生长因子等诱导后,形态学及功能方面向交感神经元分化,由于该神经元特性,目前已做为一个广泛使用的神经元体外模型,用于神经生物、中枢神经系统疾病、神经毒素等方面的研究,也是一个可行的神经蛋白组学研究模型。因此,我们运用PCI2细胞系进行METH体外损伤实验,初步探讨METH对PCI2细胞的毒性损伤作用,并在此基础上运用分子生物学、蛋白质组学及质谱分析技术,对METH作用PCI2后的差异表达蛋白点进行筛选和鉴定,以期在体内实验基础上筛选出新的差异表达蛋白点,

5、并根据蛋白质功能,进一步探讨METH的神经毒性机制。此外,也为PCI2细胞系在后续METH体外研究提供基础。方法1.METH对PCI2细胞毒性损伤的研究采用已分化的PCI2细胞,用高糖DMEM培养基(含10%胎牛血清,1:100双抗)进行培养,将细胞置于37℃,5%C02的培养箱中,细胞生长至对数生长期,达80%汇合后进行实验。实验分为对照组(0mmol/L)和实验组,即0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L、2.0mmol/L及2.5mmol/LMETH组。细胞80%汇合后实验组分别用上述不同浓度METH处理,对照组加入等体积的‘DMEM培养液,继续

6、培养24h。24h后,倒置显微镜下观察PCI2细胞形态改变,MTT法检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测细胞早期凋亡率,NO检测试剂盒硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量。取II硕士学位论文2.5mmol/LMETH处理的PCI2细胞用NOS检测试剂盒检测NO上游MOS活力,westernblot技术检测细胞NO下游产物硝基酪氨酸即3-NT表达水平。2.METH诱导PCI2细胞损伤的差异蛋白质的筛选与鉴定细胞培养方法同前。细胞生长至对数生长期,达80%汇合后,实验组给予2.5栅ol/LMETH处理,对照组加入等体积DMEM培养液。METH

7、处理PCI2细胞24h后,去除培养基,胰酶消化收集细胞,冷PBS洗两次,3000r/min离心5min,去上清残留细胞团块。根据细胞团块大小加入样本裂解液(尿素8M、CHAPS4%(w/v)、DqT40mM、IPGbuffer2%(v/v)、I%PMSF),室温变性30min,4"C12000r/min离心20min,提取细胞总蛋白质。丙酮沉淀法去除蛋白中杂质。Braford法对蛋白质进行定量。应用双向凝胶电泳(2.DE)技术分离蛋白质,IamgescannerlII透射扫描仪获取凝胶图谱。用ImageMaster7.0软件对

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。