sirna抑制znf139前后胃癌bgc823细胞差异蛋白质的筛选与鉴定

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2、和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：匆栅导师签章．趣畛弘哆年；其墨日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文siRNA抑制ZNFl39前后胃癌BGC823细胞差异蛋白质的筛选与鉴定前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯ool'．ge⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60中文摘要siRNA抑制ZNFl39前后胃癌B6C823细胞差异蛋白质的筛选与鉴定摘要目的：胃癌是全球第二大癌症致死性疾病，尤以中国等其他东亚国家高发。尽管世界各国的学者在对胃癌的发生发展和诊断治疗的研究中，已经发现许多胃癌相关基因和蛋白，但是仍然没有全面的揭示胃黏膜细胞的恶化、增殖凋亡、侵袭转移等机制。有研究表明，人锌指蛋白(zincfingerprotein，ZNF)家族基因在多种肿瘤如乳腺癌、肝癌、卵巢癌

5、、胃癌等的发生和肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及多药耐药有关。锌指蛋白139(zincfingerprotein139，ZNFl39)基因编码表达锌指蛋白亚科KRAB的转录调节蛋白，该蛋白含有重复的与保守序列相连接的Cys2．His2(C2H2)锌指结构域，而这种结构被认为与特异的DNA调控基因的转录、参与RNA转录后调控、介导蛋白质间相互作用。本实验室前期研究发现ZNFl39的异常表达与胃癌的分化密切相关，但ZNFl39与胃癌的发生发展的具体机制之间的关系尚不清楚。本实验用ZNFl39特异性siRNA转染人胃癌细胞

6、株BGC823，研究被抑制后ZNFl39基因mRNA的表达，并依靠蛋白质组学技术进一步探讨ZNFl39基因被抑制前后胃癌细胞差异表达的蛋白质及其生物学功能。方法：1用含有ZNFl39特异性siRNA的质粒转染胃癌细胞BGC823抑制ZNFl39基因的表达，应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测转染前后BGC823细胞内ZNFl39mRNA表达变化情况。2培养胃癌细胞株BGC823，通过siRNA转染胃癌细胞抑制ZNFl39基因的表达，应用双向差异凝胶电泳分离、筛选转染前后BGC823细胞内差异表达的蛋白质，

7、然后用液相质谱一色谱技术鉴定并用生物信息数据库分类相关蛋白质。3采用蛋白质印迹技术(Westernblot)验证鉴定出的蛋白质在转染前后胃癌细胞中表达量与蛋白质组学方法结果是否一致。结果：中文摘要1siRNA抑制ZNFl39前后胃癌细胞ZNFl39mRNA表达发现：阳性组的ZNFl39mRNA的相对表达量(15．6±1．61)×10。5显著低于空白对照组(68．8x+4．05)×10～，且二者之间差异有统计学意义(P=9．1×lO。10

8、意义(P--O．491>0．05)。2胃癌细胞双向差异凝胶电泳图谱中差异蛋白质点的分析：应用DeCyderDifferentialAnalysisSoftware选取了8个具有显著表达差异的蛋白质点，并用Ettanspotpicker系统进行挖点。这些蛋白质在阳性组胃癌细胞蛋白样品中表达上调的有5个，表达下调的有3个。3对差异蛋白的质谱鉴定和数据库检索发现：