sirna抑制znf139前后人胃癌原位移植祼鼠血清差异蛋白质的筛选与鉴定

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2、了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：陈筏良目录0IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2337167中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8研究论文siRNA抑制ZNFl39前后人胃癌原位移植裸鼠血清差异蛋白质的筛选与鉴定前言⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯1O结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．20多日木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯．40参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40综述差异蛋白组学在胃癌研究中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56中文摘要siRNA抑制ZNFl39前后人胃癌原位移植裸鼠血清差异蛋白质的筛选与鉴定摘要目的：以胃癌SGC7901细胞原位移植裸鼠模型为对象，通过荧光双向差异凝胶电泳(2D．DIGE)结合液质联用(LC．MS)鉴定技术等蛋白质组学方法研究抑制ZN

5、Fl39后对胃癌原位移植裸鼠血清的影响，为ZNF139参与胃癌进展并发现新的肿瘤标志物提供依据。方法：1培养人胃癌细胞株SGC7901，针对ZNFl39基因设计siRNA，构建siRNA．ZNFl39表达质粒。通过X．tremeGENEHP转染试剂介导转染胃癌细胞株SGC7901，并通过qRT-PCR检测细胞中ZNFl39mRNA的相对表达量，计算其抑制效率。2以siRNA．ZNFl39质粒和阴性对照质粒转染胃癌细胞SGC7901，G418筛选出稳定转染细胞和普通的SGC7901细胞分别注入裸鼠皮下

6、。每4天测量皮下瘤长短径，待皮下瘤直径约1．0cm左右时取出，剪成大小约lmm3瘤块进行鼠间传代，将第六代皮下瘤应用OB生物胶粘贴法进行原位移植。3用血清白蛋白／免疫球蛋白清除试剂盒去除胃癌原位移植裸鼠血清中高丰度蛋白，利用SDS．PAGE检测去除高丰度蛋白前后蛋白的完整性及血清蛋白的变化。4采用2D．DIGE技术分离siRNA．ZNF139干扰前后胃癌原位移植裸鼠血清蛋白。应用DeCyderDifferentialAnalysisSoftware选取差异明显的蛋白点并利用Ettanspotpick

7、er挖取胶中的差异蛋白点，胶内酶解后利用LC．MS进行分析。再应用BioWorks软件中的SEQUEST运算方法进行数据库检索。5将已鉴定的部分差异蛋白通过蛋白质印记(Westernblot)从蛋白质水平进行验证，检测是否与蛋白质组学结果一致。结果：1不同浓度siRNA．ZNFl39质粒转染胃癌SGC7901细胞后ZNFl39中文摘要mRNA表达的变化qRT-PCR检测显示在099／ml、0．41．tg／ml、0．699／ml、O．899／ml、1．099／ml重组质粒转染的胃癌SGC7901细胞中

8、ZNFl39mRNA相对表达量分别为1．0034-0．0970，0．7517+0．0436，0．36114-0．0445，0．1622+0．0181，0．5531士0．0377，统计分析显示与O岭／ml组相比各组有显著差异衅0．05)，其中以0．899／ml组抑制效率最高，为83．83％。2siRNA抑制ZNFl39对裸鼠皮下瘤生长的影响接种胃癌细胞SGC7901六天后空白组和阴性组裸鼠均长出皮下瘤，十天后实验组裸鼠可见皮下瘤，之后瘤体不断增大。统计学分析表明空白组皮