sirna抑制znf139对人胃癌裸鼠原位移植瘤增殖影响的研究

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2、Fl39对人胃癌裸鼠原位移植瘤增殖影响的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38综述

3、基因治疗在肿瘤增殖中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50中文摘要siRNA抑制ZNFl39对人胃癌裸鼠原位移植瘤增殖影响的研究摘要目的：胃癌是世界范围内最常见的消化道肿瘤之一，其具有发病率高、死亡率高、早期诊断率低、晚期治疗效果差的特点，2008年全球的胃癌新发病例将近100万，近74万人死于胃癌，严重威胁人类的生命健康[11，我国是胃癌发病率及死亡率最高的国家之一，目前对于胃癌治疗以手术为主，化疗为辅，但由于大多数胃癌发现时已经处于中晚期，只能行

4、保守治疗，但胃癌对于化疗敏感性低、耐药性高，所以效果不佳，进展期胃癌的5年生存率仍然徘徊在30％'-'-'40％左右。随着肿瘤遗传学及分子生物学进一步发展，人们对于胃癌的发病机制有了更深一步的认识，胃癌是一个多步骤、多阶段、多因素参与的疾病，在正常的细胞组织生长过程中，由于上述原因都有可能导致细胞增殖的失调，最终导致胃癌的发生。如果在这个过程中，我们干预某些基因的表达，将会对于胃癌的预后起着积极的作用。近年来，锌指蛋白在肿瘤中的作用受到了广泛的关注。Krfippel家族锌指蛋白是锌指类转录因子中的一类，其能通过调控相关基因的转录和表达，来影响肿瘤的发生与进展。例如：在骨肉瘤的

5、组织中ZNFl33呈高表达，可作为骨肉瘤发病过程中特异性的蛋白标志物【2】。ZNFl39是锌指蛋(jKrfippel家族的成员，有实验证实，ZNFl39在胃癌组织高表达，推测其可能参与对胃癌发展演进及胃癌MDR的调控【3】。本实验将以SGC7901细胞建立的胃癌原位移植裸鼠肿瘤为研究对象，观察沉默转录因子ZNFl39后对于肿瘤增殖的影响并对其机制进行讨论。方法：1将针对ZNFl39的小干扰RNA的质粒以脂质体LipofectamineTU2000为介导，将其按不同浓度转染入体外培养的人胃癌SGC7901细胞中，用qRT-PCR检测其抑制效率。2收集对数期生长的人胃癌SGC79

6、01细胞，配置成细胞悬液后进行裸鼠皮下注射，待皮下瘤体直径为1．5cm时，取胃癌组织块lmm3，接种到下一只裸鼠的皮下，进行鼠间传代，以相同方法传代5次后取出移植瘤，剪成lmm3大小组织块进行胃壁浆膜下原位移植，制备胃癌原位移植裸鼠中文摘要肿瘤模型。3将针对ZNFl39的小干扰RNA的质粒以脂质体Lipofect锄inellM2000为介导，转染进入裸鼠肿瘤内，同时设置阴性对照组(转染空质粒组，以下简称阴性组)和空白对照组(注射生理盐水组，以下简称空白组)，转染作用合适的时间后处死裸鼠，取出瘤体备用。4以机械法将三组不同处理因素的瘤体制备成悬浮细胞，进行原代培养，应用MTT法

7、检测0、24、48、72小时细胞的增殖情况。5转染48小时候，将瘤块以70％酒精固定，用机械法将瘤块制备成悬浮细胞，运用流式细胞术比较三组细胞周期的变化并计算其增殖指数。6应用RT-PCR技术检测ZNFl39、PCNA、CyclinDmRNA在三组中的表达情况结果：1体外实验证实，构建的siRNA．ZNFl39能特异性沉默SGC．7901细胞系中ZNFl39表达，qRT-PCR检测显示在0btg／1．tl、0．41．tg／lxl、0．61xg／lxl、0．81xg／}tl、1．O“∥山重组质粒转染后的S