内质网应激在糖尿病肾组织足细胞损伤中的表达和意义

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1、北京协和医学院中国医学科学院硕士学位论文目录英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11第一部分：内质网应激在中晚期糖尿病肾病患者肾组织足细胞损伤中的表达和意义研究对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20结

2、论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第二部分：内质网应激在糖尿病前期动物模型肾组织足细胞损伤中的表达和意义研究对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46参考文献1⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯55参考文献2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯··64致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯70北京协和医学院中国医学科学院硕士学位论文主要英文缩略词北京协和医学院中国医学科学院硕士学位论文4北京协和医学院中国医学科学院硕士学位论文中文摘要研究背景糖尿病肾病是糖尿病最常见的微血管并发症之一，中晚期以大量蛋白尿及弥漫肾小球硬化为主要表现。糖尿病肾病是引起终末期肾衰竭(EndStageRenalDisease，ESRD)的重要原因之一⋯。研究表明在糖尿病肾病发病过程中，足细胞数目明显减少，并

4、且减少的程度与蛋白尿量成正相关，足细胞数目越少，患者进展至终末期肾衰竭的速度越快堙1。足细胞是高度分化的细胞，没有再生功能。因此，足细胞数量减少所造成的肾小球滤过屏障破坏将无法修复口1。足细胞的特异性突触连接蛋白(Synaptopodin)主要表达在细胞膜上，WT一1是足细胞特异性核蛋白，表达在细胞核上，通过对这两者的观察可以问接了解足细胞的损伤情况。内质网应激是细胞的一种适应性反应n1，细胞在受到外界刺激时内质网会通过增加蛋白的降解和运输来加强细胞对有害刺激的抵抗能力。GRP78是一种内质网应激分子伴侣，它的表达在一定程度

5、上反映了内质网对应激调节的强度，有研究证实内质网应激与肾组织损伤存在一定的关系，但是在糖尿病肾病肾组织的足细胞上还缺乏深入的研究。我院陶建瓴副教授等乜21曾在早期糖尿病肾病动物模型上观察到ERS与肾组织足细胞损伤具有相关性，但是目前仍然缺乏有关ERS在糖尿病肾病中晚期及糖尿病前期肾组织足细胞损伤的体内研究。本研究通过临床和动物实验两部分分别对中晚期糖尿病肾病和糖尿病前期两个阶段进行研究，以期了解内质网应激在糖尿病肾脏足细胞损伤中的表达和意义。研究目的1、观察内质网应激蛋白GRP78在中晚期糖尿病肾病患者肾组织足细胞中的表达：

6、2、检测糖尿病前期动物模型中内质网应激是否激活，及与足细胞损伤的关系。研究方法1、选取2001年1月至2011年1月北京协和医院肾内科接受肾活检确诊为DN的48例患者，分析其临床资料，将患者分为尿蛋白量>3．59／d组(n=31)和尿蛋白量<3．59／d组(n=17)两组。行威廉姆斯肿瘤蛋白1(WT一1)免疫组化染色。肾组织足细胞骨架蛋白Synaptopodin和内质网应激蛋白GRP78行免疫荧光双染，在激光共聚焦显微北京协和医学院中国医学科学院硕士学位论文镜下观察。2、以SPF级Wistar大鼠36只为研究对象，分成实验组

7、及对照组，每组大鼠18只，对实验组进行棕榈酸盐的饲养，对照组进行正常饮食喂养，分别在3、6、9周检测血清胰岛素水平，进行wT一1免疫组化染色检测足细胞数量变化，同时免疫印记法(Westernblotting)检测Synaptopodin和GRP78的表达，观察糖尿病前期肾组织足细胞骨架蛋白Synaptopodin的损伤情况，及与内质网应激状态之间的关系。研究结果1、48例DN患者平均年龄为45．4±11．2岁，男女比例1：1，病理类型表现为弥漫硬化型22例(46％)，结节硬化型26(54％)例。两组之间足细胞WT-1阳性表达

8、面积有显著统计学差异(P=O．003)，足细胞密度随着尿蛋白量的增加逐渐降低，两者之间呈负相关(P=O．005)。免疫荧光检测肾小球Synaptopodin及GRP78表达呈线样沿基底膜排列，并且随着尿蛋白量增加Synaptopodin和GRP78的表达量均降低，具有显著差异性(P=O．0