smac 和livin在肾细胞癌组织中表达及意义

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1、Smac和Livin在肾细胞癌组织中表达及意义：王浦刘勇王世平马炎【摘要】目的探讨Smac和Livin在肾细胞癌（肾癌）组织中的表达及两者在肾癌细胞凋亡中的作用和关系。方法应用半定量RT-PCR技术检测49例肾癌组织和20例正常肾组织Smac和LivinmRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Smac和Livin蛋白表达情况。结果SmacmRNA及其蛋白在肾癌组织中的表达显著低于正常肾组织（χ2=5.929、6.538，P<0.05），LivinmRNA及其蛋白在肾癌组织中的表达显著高于正常肾组织（χ2=

2、27.600、23.351，P<0.05），且两者均与肾癌临床病理参数有关。在肾癌组织中，Smac和Livin表达强度之间呈负相关（r=-0.39,P<0.05）。结论Smac在肾癌组织中低表达，其表达与Livin呈明显的负相关，两者可能是肾癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。【关键词】癌,肾细胞;Smac;Livin;细胞凋亡　　［ABSTRACT］Objective［ToinvestigatetheexpressionsofSmacandLivinandtheirassociationa（RCC）.Me

3、thodsTheexpressionsofLivinandSmacmRNAerasechainreaction（RT-PCR）andELISAfortissuesof49RCCand20normalkidneys.ResultsExpressionsofSmacmRNAandproteininRCCtissuealrenaltissue（χ2=5.929，6.538;P<0.05）,RNAandproteininRCCtissuealone（χ2=27.600,23.351;P<0.05）.BothSmac

4、andLivinexpressionsetersofclinicalpathology.AnegativecorrelationacandLivininRCC（r=-0.39,P<0.05）.ConclusionSmacexpressionportantlinkintheapoptosissignaltransductiona,renalcell;Smac;Livin;Apoptosis细胞凋亡是机体维持内环境稳定的重要机制之一，如果细胞凋亡受抑，细胞死亡率下降，将导致细胞数目不断增加，表现出生长优势，这是肿瘤形

5、成的一个重要基础。细胞凋亡是基因表达的结果，受促凋亡基因和抑凋亡基因的调控［1］。许多与凋亡和增殖有关的基因如p53、Fas/FasL、Smac、Bcl-2、IAP等都与肾细胞癌（简称肾癌）的发生发展有关，Smac和Cyt-C是一起由线粒体释放到细胞质的重要的凋亡调节子,Smac存在于哺乳动物细胞中，能直接与凋亡抑制蛋白（IAP）结合，使其丧失抑制Caspase活性的作用，因此Smac在细胞凋亡的途径中有着极其重要的作用［2］。Livin属于IAP家族新成员,是具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双功能蛋白。本研究旨在探讨

6、Smac和Livin在肾癌组织和正常肾组织中的表达及两者的关系。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1标本　　2007年10月～2008年3月，收集青岛大学医学院附属医院泌尿外科手术切除的肾癌标本49例,男30例,女19例，年龄29～82岁，平均42.7岁。均经病理学检查证实为肾透明细胞癌，其中高分化12例，中分化26例，低（未）分化11例；Ⅰ期21例，Ⅱ期13例,Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。正常肾组织20例，取自肾结石或重度肾积水病人并经病理学证实，其中男12例，女8例，年龄34～67岁，平均52.0岁。所有病人术前

7、均未行放疗、化疗或介入栓塞治疗。术后立即切取标本，用无菌生理盐水冲净血液后迅速置于液氮中，后转移至-70℃冰箱保存备用。　　1.1.2主要试剂　　RNA提取液Trizol、PrimeScriptRT-PCR试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司，ELISA试剂盒购自美国Invitrogen公司。　　1.2方法　　1.2.1RT-PCR检测Smac和Livin基因mRNA表达　　①Smac、Livin基因以及内参GAPDHRNA引物：均由上海生物工程公司合成，其序列及扩增片段见表1。②总RNA的提取：按Trizol试剂说明书

8、提取总RNA。琼脂糖变性凝胶电泳检测RNA的完整性，紫外线分光光度计测定吸光度值以确定RNA浓度和纯度。③cDNA合成：取总RNA1μg，dNTPMixture（10mmol/Leach）1μL,Random6mers（20μmol/L）1μL，加超纯水至总体积10μL，65℃5min，冰上骤冷；加入5×PrimeScriptBu