内质网应激在高血压血管内皮细胞损伤中的作用研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：2010004宁夏医科大学硕士研究生学位论文内质网应激在高血压血管内皮细胞损伤中的作用研究TheroleofERstressintheinjuryofhypertensivevascularendothelialcells学位申请人：路静指导教师：景丽教授申请学位门类级别：医学专业名称：病理学与病理生理学研究方向：心血管病理所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一三年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDeg

2、reeTheroleofERstressintheinjuryofhypertensivevascularendothelialcellsStudent’sName:LuJingSupervisor：JingLiSubjectCategory:MedicalScienceMajor:PathologyandPathophysiologySpecialty:CardiovascularpathologyCollege:NingxiaMedicalUniversityCompletionDate:Api.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明

3、：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编

4、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要内质网应激在高血压血管内皮细胞损伤中的作用摘要研究目的为探讨内质网应激（ERStress）在高血压导致内皮细胞损伤中的作用，本实验通过培养人脐静脉内皮细胞（humanumbiliealveinendothelialcells，HUVECs)，不同浓度血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）持续刺激24小时模拟高血压状态，MTT

5、法检测细胞的凋亡率，透射电镜观察内质网的形态学改变，免疫荧光化学和western-blotting法检测内质网应激（ERStress）标记蛋白PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα及PDI在内皮细胞中的表达；为进一步证实ERStress在高血压血管重构和高血压内皮细胞损伤中的作用，本实验用免疫组化染色观察PERK在不同周龄自发性高血压大鼠（SHR）大鼠主动脉中的表达，从而进一步明确高血压发生发展的可能机制。研究方法第一部分：选择生长状态良好的5~8代体外培养HUVECs进行实验。相差显微镜观察细胞生长情况，待细胞活力旺盛即细胞处于对数期生长时，

6、无血清培养6h，分组如-5-6下：①AngⅡ1组（10mol/LAngⅡ+无血清培养基，培养24h）②AngⅡ2组（10mol/L-8AngⅡ+无血清培养基,培养24h）③AngⅡ3组（10mol/LAngⅡ+无血清培养基,培养24h）④ERStress阻断剂组（ERStress阻断剂salubrinal+无血清培养基1h后，加入AngⅡ-6使终浓度至10mol/L，培养24h）⑤空白对照组（无血清培养基，培养24h）。收集细胞，MTT法检测细胞凋亡率，透射电镜观察内质网的形态学改变，细胞免疫荧光化学和western-blotting法检测ERStr

7、ess标记蛋白PERK、IRE1α、BiP、Ero1-Lα及PDI在内皮细胞中的表达，并观察PERK通路阻断剂salubrinal对HUVECs是否有保护作用。第二部分：饲养雄性自发性高血压大鼠（SHR）和WistarKyoto（WKY）大鼠各15只，每周测大鼠尾动脉压一次，分别在8、16、24周龄处死动物，取出胸主动脉，HE染色观察不同周龄高血压大鼠血管内皮细胞变化，免疫组化染色观察ERstress重要成员I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要PERK在大鼠主动脉内皮细胞中的表达。研究结果第一部分：经MTT法检测，与对照组相比较，AngⅡ处理后H

8、UVECs-9-4的凋亡率明显增加，随着AngⅡ浓度的增高（10mol/L~10mol/L），HUVECs的