内质网应激蛋白和黏蛋白2在小鼠结肠炎中的表达及意义

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1、分类号UDC密级编号硕士学位论文内质网应激蛋白和黏蛋白2在小鼠结肠炎中的表达及意义Expressionofendoplasmicreticulumstressproteinsandglycosylatedproteinmucin2inmousecolitis学位申请人：李小珍指导教师：金建军教授、高强主任医师一级学科：临床医学二级学科：内科学学位类别：医学硕士2015年05月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

2、果，也不包含为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要背景：炎症性肠病(inflammationboweldisease,IBD)是一种慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)和克罗恩病(Crohn’sdisease,CD)两种。近年来随着生活条件的改善和环境不断变化，该病在我国的患病人数呈明显增加趋势。炎症性肠病的病因和发病机制尚不明确，目前多认为该病的发生是由遗传

3、、环境、微生物和免疫等多种因素相互作用所致。内质网(endoplasmicreticulum,ER)是真核细胞内负责蛋白质合成、折叠和分泌的重要细胞器，许多因素可以引起内质网稳态紊乱，如营养缺乏、氧化应激等，导致未折叠或错误折叠蛋白质在内质网腔堆积，引发内质网应激(ERstress,ERS)。当出现内质网应激时，机体将启动一系列适应性反应使细胞适应应激继续存活，这种反应称为未折叠蛋白反应(unfoldedproteinresponse,UPR)。未折叠蛋白反应通过三种感受器蛋白发出一系列调节信号，通过限制蛋白质翻译减轻内质网负荷，帮助蛋白

4、质正确折叠，加速错误折叠蛋白质降解，恢复内质网稳态。当内质网应激持续时间过长或反应程度过深将会引起细胞凋亡，导致组织细胞受损。肠道上皮细胞不断更新，属于高分泌细胞，对内质网应激尤其敏感。近年来研究发现内质网应激与多种疾病发生发展有关，由内质网应激诱导的未折叠蛋白反应多条通路与炎症反应通路相偶联。有人提出内质网应激参与炎症性肠病的发生与发展，但内质网应激对炎症性肠病的具体作用机制尚不明确。肠粘膜屏障损伤是溃疡性结肠炎发病的一个关键因素，大量黏蛋白构成的粘液层是肠粘膜重要的化学屏障，杯状细胞产生的黏蛋白(mucin,MUC)2是结肠粘液层主要

5、的大分子结构，有研究表明MUC2表达异常与肠道疾病密切相关。本研究利用葡聚糖硫酸钠(dextransulphatesodium,DSS)制造小鼠结肠炎模型，检测炎症状态下结肠组织的内质网应激蛋白和MUC2的表达情况，试图为进一步认识炎症性肠病的发病机制提供更多科学依据。目的：观察内质网应激蛋白GRP78、PERK、ATF6、IRE1βmRNA和蛋白，IRE1α、CHOP、XBP1u和XBP1smRNA以及MUC2mRNA和蛋白在不同浓度DSS诱导的结肠炎组织中的表达情况，探讨这些分子表达变化在炎症过程中的意义。方法：将8周龄雄性C57BL

6、/6小鼠随机分为三组：正常对照组：正常自由饮水；1.5%DSS组和2.5%DSS组：分别自由饮用含1.5%(1.5g/100ml)和2.5%DSS的水溶液6天建立急性肠炎模型。每组10只。通过疾病活动指数(diseaseactivityindex,DAI)评分、测量结肠长度、苏木素伊红(hematoxylinandI摘要eosin,HE)染色病理评分、检测炎性因子TNFα和IL-6mRNA的表达水平来评估结肠炎症损伤程度。采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测结肠组织中GRP78、IRE1β、ATF

7、6、PERK和MUC2的蛋白表达水平；实时定量PCR(real-timequantitativePCR,RT-PCR)法检测GRP78、IRE1α、IRE1β、PERK、ATF6、XBP1u、XBP1s、CHOP和MUC2的mRNA表达水平。结果：1.正常对照组无结肠炎表现，1.5%DSS组和2.5%DSS组分别呈轻度和重度结肠炎。炎性细胞因子TNFα和IL-6mRNA在1.5%DSS组表达增加，在2.5%DSS组表达进一步增加(均P<0.05)。2.免疫组化结果：GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和MUC2蛋白在正常对照组均表达

8、；IRE1β、PERK、ATF6和MUC2蛋白在1.5%DSS组表达减少(均P<0.05)；GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和MUC2蛋白在2.5%DSS组表达均明显减少(均P<0.