骨桥蛋白在肾癌中的表达及意义

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1、河北医科大学硕士学位论文骨桥蛋白在肾癌中的表达及意义姓名：曹赫然申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张爱莉201203中文摘要骨桥蛋白在肾癌中的表达及意义摘要肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤，近年该病的发病率呈升高趋势。肾癌细胞具有增殖、迁移和侵袭能力，这些作用是肾癌扩散、转移的生物学基础。因此在更深层次特别是在分子水平研究肾癌的增殖、迁移，对于肾癌的发病机制、进展过程及治疗方案均有重要意义。骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种分泌型糖基化磷蛋白，该蛋白参与构成细胞外基质成分，并与多种

2、细胞膜蛋白发生偶联，参与细胞的迁移及运动过程。该蛋白的异常表达己被证明与多种疾病有关。然而，OPN与肾癌的关系尚不清楚，本研究通过探讨OPN与肾癌增殖、侵袭的关系，旨在揭示该蛋白在肾癌发病过程中的重要作用，并为今后肾癌的药物治疗提供新的靶点。方法：1免疫组织化学染色将组织切片脱蜡至水，使用SP三步法检测组织切片中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)及OPN的表达变化2组织总RNA提取及RT-PCR反应提取各组织的总RNA，经定量、电泳验纯后进行

3、逆转录反应，之后将反应产物用特异引物进行PCR扩增。经电泳后半定量检测PCNA及OPN的表达变化。‘3人肾癌786．O细胞培养‘将786．O细胞传代培养，待细胞生长至80％时进行实验。4细胞增殖实验使用MTT法对各组细胞的增殖活力进行测定，检测OD570值比较各组间增殖活力差异。采用细胞计数法，对各组细胞进行计数，以验证OPN对786．O细胞增殖的影响。5细胞侵袭实验将各组细胞传代至Transwell的上室，在下室浸没的溶液中并加入不同浓度的OPN，计数侵袭入下室薄膜上的细胞个数。中文摘要结果：1

4、OPN表达水平与肿瘤细胞增殖能力相关免疫组织化学及RT-PCR分析结果表明，PCNA及OPN在肾癌组织中的表达均高于癌旁肾组织(P<0．01)。且PCNA及OPN的表达强度随临床分级的升高而增强。PCNA的表达水平与OPN表达水平有关(P

5、袭能力Transwell实验结果表明，用不同浓度的OPN处理786一O肾癌细胞，侵袭入下室的细胞数目明显增多(P

6、tionandInvasionofRenalCamCellsancerellsABSTRACTRenalcancerisacommonurologicalcarcinoma，mostofwhichisclearcellcarcinoma．Similarasmostmalignanttumors，therenalcancercellsalsohavepotentproliferationandinvasionabilities．However,themechanismsofproliferation

7、andinvasionofcancercellsarestillnotveryclear．Therefore，researchesbasedonmolecularlevelaremeaningfultounderstandmoreaboutthesemechanisms．Osteopontin(OPN)isasecretedphosphoprotein，whichhasbeenverifiedasafactorrelatedwithmigration，adherenceandinvasioninv

8、arioustissues．However,therelationshipbetweenOPNandrenalcancerstillremainsunknown．Thus，inthepresentresearch，weinvestigatedtheexpressionofOPNinrenalcancertissuesandanalyzetherelationshipbetweenOPNandproliferation．Besides，wealsoverifiedtheeffects