n乙酰半胱氨酸对bde209诱导原代培养新生鼠海马神经元细胞的损伤影响与相关机制的研究

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1、广州医学院硕士学位论文BDE一209对原代培养胎鼠海马神经元细胞的影响及相关机制研究N一乙酰半胱氨酸对BDE-209诱导原代培养新生鼠海马神经元细胞损伤的影响及相关机制研究硕士研究生：刘付春导师：陈敦金教授广州医学院第三附属医院妇产科广州市妇产科研究所中文摘要【背景】1．关于多溴联苯醚(P01ybrominatedDiphenylEthers，PBDEs)PBDEs是一系列含溴原子的芳香族化合物。根据苯环上溴原子的个数和位置的不同，多溴联苯醚总共有209种同分异构体。其最大的用途是作为阻燃剂，已被广泛用于电子电器设备、自动控制设备，建筑材料和纺织品等商品化产品。由于PB

2、DEs环境中不易分解可形成持续性的有机污染物、并具有高亲脂性、生物累积及生物放大效应等特性。可通过食物、母乳及呼吸途径进入生物体内，对环境和人体造成巨大的潜伏性的危害。故有专家称之为“化学定时炸弹”。由PBDEs化学结构与早就臭名昭著的多氯联苯(PCB)及甲状腺激素相似，其实，自开始使用至今，PBDEs对人体健康的潜在不良因素影响～直受到研究者的关注：以往研究证实低溴PBDES可导致甲状腺素分泌紊乱、神经行为改变以及诱发恶性肿瘤，由于其亲脂＼及化学结构与甲状腺激素的类似，其对生物毒性作用最受人关注的就是发育的神经毒性。研究者对发育神经毒性的关注依据主要来源于以下几个方面

3、发现：1)孕期或产后的PBDEs暴露的动物实验，能够造成动物的长期行为改变，尤其是指运动活动及认知活动及记忆能力。2)PBDEs会影响甲状腺的内环境稳定，进而导致发育神经的毒性。3)研究表明年幼的动物对于PBDEs的排泄能力比成年的动物差，并且在年幼的动物体内(包括脑组织)检测的PBDEs浓度比成年的动物高。4)P肋Es能够通过乳汁排泄，在北美发现相当高的浓度。5)粉尘是PBDEs暴露的一个主要来源。因此，在美国以及欧洲等地，低溴类如广州医学院硕士学位论文BDE-209对原代培养胎鼠海马神经元细胞的影响及相关机制研究BDE一47，99，153等相继被限制生产及使用。2．

4、关于十溴联苯醚(BrominatedDiphenylEthers一209，肋E-209)BDE-209为PBDEs的高溴类化合物，是一种含十个溴原子的高溴多溴联苯醚，由于其具有添加量少而热稳定性好，价格便宜等优势，目前应用最广泛。由于用量多＼用途广，推测环境中浓度高＼生物蓄积量大，BDE一209在生物体中的浓度还将继续升高。由于BDE-209的高亲脂性，易通过血脑屏障，有研究者认为BDE一209在围产期暴露可以导致仔鼠成年后的自发行为以及学习记忆能力的影响。研究也证明BDE-209具有神经发育毒性，免疫毒性，内分泌毒性以及致癌性等。但也有学者认为BDE-209在体内的代

5、谢快，蓄积低，在常规暴露水平下对机体不造成影响。由于研究结果不一致，故研究BDE-209的生物毒性是很有必要的。3．关于N一乙酰半胱氨酸(N—acetylcysteine，NAC)NAC可提高机体内的谷胱甘肽(glutathion，GSH)含量。NAC作为小分子物质，易于进入细胞，脱乙酰基后成为GSH合成的前体，促进GSH的合成，提高组织内GSH含量，增强组织的抗自由基及药物和毒物损伤能力。GSH是由谷氨酸，半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，半胱氨酸上的巯基是其活性基团，GSH具有解毒、抗氧化等多种重要功能。体内和体外的实验证据均提示NAC能提高细胞内GSH的生物合成。N

6、AC提高体内GSH含量的作用可以解释其在多种疾病过程中的保护作用。很多体内和体外的研究表明NAC能够抑制多种毒物的氧化应激作用，从而减轻细胞或组织的凋亡及损伤。我们前期实验结果已证实，孕哺期母鼠BDE-209暴露可导致仔鼠神经系统发育异常，出现学习与记忆力障碍，而对其机制的进一步研究提示可能与氧化应激反应增强、细胞凋亡增加有关。本研究将在前期研究基础上，本课题从细胞分子水平，用BDE-209对新生鼠海马神经元细胞进行染毒，并观察NAC减少其毒性作用，光镜观察神经元细胞的形态与突触发育情况，通过检测神经细胞存活率、细胞凋亡率、P38MAPK的表达、Ca2+含量、ROS氧化

7、应激指标，初步探讨BDE-209的神经毒性作用机制及N一乙酰半胱氨酸的干预效果。本课题分为以下四个部分进行各项具体实验。4广州医学院硕士学位论文BDE-209对原代培养胎鼠海马神经元细胞的影响及相关机制研究第一部分N一乙酰半胱氨酸对BDF-209诱导新生鼠海马神经元细胞损伤形态学的影响【目的】取新生SD大鼠(一天内)的海马组织进行原代神经元细胞培养，鉴别神经元的纯度，观察BDE-209对原代培养新生鼠海马神经元细胞形态结构及细胞存活率的影响。【材料与方法】1．购买新生SD大鼠(一天内)，取新生鼠海马组织进行原代神经元细胞培养。2．培养7天