何首乌饮减轻aβ诱导的海马神经元损伤作用机制的研究

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20101639医学硕士学位论文何首乌饮减轻Aβ诱导的海马神经元损伤作用机制的研究学位申请人：郭胜男丁良教授指导教师：牛嗣云教授学位类别：医学硕士学科专业：药理学授予单位：河北大学答辩日期：二〇一三年五月ClassifiedIndex：CODE：10075U.D.C.：NO：20101639ADissertationfortheDegreeofM.MedicalScienceStudyoftheeffectandmechanismofHeshowuyinonallev

2、iatingtheHippocampineuronsinjuryinducedbyAβCandidate：GuoShengnanProf.DingLiangSupervisor：Prof.NiuSiyunAcademicDegreeAppliedfor：MasterofMedicineSpecialty：PharmacologyUniversity：HebeiUniversityDateofOralExamination：May,2013摘要摘要阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）是一

3、种常见的中枢神经系统退行性疾病，随着当今世界人口的老龄化，AD发病率日益增高，世界上有3500多万人患有阿尔茨海默病，并且患者的死亡率日益增加，因此有关此病的研究成为国内外的热点之一。阿尔茨海默病其病理特征表现为神经细胞内出现神经纤维缠结（过度磷酸化的Tau蛋白是其主要成分）以及细胞外存在老年斑，且主要分布在前皮质和海马区。老年斑的主要成分是Aβ(β-淀粉样蛋白)，是由β淀粉样前体蛋白（AmyloidprescursorproteinAPP）被β位点APP裂解酶剪切所生成，Aβ是AD患者发病的和病程进展的主

4、要因素，聚合态的Aβ可导致神经细胞凋亡。细胞凋亡是海马神经元损伤的主要因素，已有研究表明以何首乌为主药组成的多种中成药对大鼠的学习记忆有保护作用，广泛用于抗衰老。但何首乌饮对Aβ诱导的海马神经元损伤的保护作用机制尚未见报道。目的：探讨何首乌饮对Aβ诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法：1.采用新生24h内的SD大鼠进行原代培养海马神经元2.将培养10d的海马神经元分为以下五组：模型组：神经元培养8d后，在培养液中加入终浓度为10µmol/L的Aβ1-40培养48h；何首乌饮保护组：神经元

5、培养6d后，在培养液中加入10%的何首乌饮含药血清，预处理48h，再加入终浓度为10µmol/L的Aβ1-40培养48h；何首乌饮治疗组：神经元培养6d后，再加入终浓度为10µmol/L的Aβ1-40培养48h，再在培养液中加入10%的何首乌饮含药血清，处理48h；何首乌饮对照组：神经元培养8d后，10%的何首乌饮含药血清培养48h;空白对照组：神经元培养10d，不做任何处理。3.采用台盼蓝染色观察海马神经元存活率的变化：死细胞被染成蓝色，活细胞不着色，用未染色活细胞总数在总细胞数中所占百分比来评价何首乌饮

6、对Aβ诱导的海马神经元存活率的作用。4.采用Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率：海马神经元培养10d后进行I摘要Hoechst33258染色，在荧光显微镜下观察细胞的核染情况，随机选取10个视野，计数细胞凋亡率。5.检测各组海马神经元Trx1的表达情况：免疫组化染色观察Trx1的表达；用RT-PCR检测各组Trx1的mRNA表水平，并用Westernblot检测各组Trx1蛋白的水平。结果：1.细胞形态改变空白对照组和何首乌饮对照组神经元生长旺盛，胞体大，边界清楚，突起长，分枝连接呈网状；与

7、正常组比较，模型组细胞贴壁不牢，失去原有形态，胞体肿胀，细胞膜破裂，周围有许多细胞碎片，突起大部分断裂成断线状；何首乌饮治疗组和预防组细胞状态与模型组相比较神经元的胞体较为完整，大部分细胞有突起，且突起间有联接。2.细胞存活率的变化台盼蓝染色观察模型组存活率与空白对照组比较明显降低（P<0.05），何首乌饮治疗组和预防组与模型组比较存活率明显增高（P<0.05），何首乌饮治疗组和预防组与空白对照组比较没有显著性差异（P>0.05），何首乌饮治疗组和预防组比较也没有显著性差异（P>0.05）。3.Hoechs

8、t33258染色与空白对照组比较，模型组的凋亡率明显增加（P<0.05），与模型组比较，何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低（P<0.05）。何首乌饮治疗组和预防组与空白对照组比较没有显著性差异（P>0.05），何首乌饮治疗组和预防组比较也没有显著性差异（P>0.05）。4.细胞免疫染色结果Trx1阳性物质呈棕色，位于细胞质。染色结果显示与空白对照组比较，模型组Trx1的表达明显降低（P<0.05）；与模型组比