补肾方剂诱导骨髓间充质干细胞增殖分化的理论和实验的研究

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1、南京中医药人学博：l：学位论文中文摘要研究目的：本研究在中医学“肾藏精”理论指导下，结合现代干细胞生物学研究成果，分析中医学“先天之精”与干细胞的相关性，以及肾精与骨髓间充质干细胞之间的内在联系；观察补。肾方剂对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响，探讨其调控骨髓间充质干细胞增殖、分化的分子机制，以期为探索“肾藏精"理论的科学内涵以及补肾方剂的临床应用提供理论和实验依据，为中医药在干细胞领域的深入研究提供新的思路。研究方法：1．理论研究g通过系统整理与总结中医学“精"、“先天之精"、“肾精”等理论以及现代干细胞研究的成果，采用比较分析的方法，对干细胞的“先天之精"属性以及

2、“肾精"与间充质干细胞的相关性进行全面的分析，从干细胞层面探讨补肾法治疗肾精亏虚相关疾病的可能机理。2．实验研究：采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞；采用细胞形态学、细胞生长曲线、细胞周期、细胞表面标示检测相结合的方法，对培养的rBMSCs进鉴定：采用MTT法分别检测六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸一四首经典补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs细胞毒性及增殖的影响；采用ALP活性检测补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs骨向分化的影响；采用Westernbloting检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCsBMP．2蛋白的表达；采用实时荧光定

3、量PCR检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCsRunx2mRNA的表达。研究结论：1．理论研究：中医学理论之“先天之精"学说与干细胞之间无论来源还是功能均具有极高的相似性，而“肾精”与间充质干细胞的关系尤为密切·，间充质干细胞可以看作“肾精”功能体现的主要物质基础，补肾方剂治疗肾精亏虚的效应机理可能与调控间充质干细胞增殖、分化等生物学行为有关。2．实验研究：(1)全骨髓贴壁法分离的rBMSCs符合BMSCs的生物特性，建立的rBMSCs体外培养体系可满足实验要求。(2)四首经典补肾方剂(六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸)水提液均可促进体外培养的rBMSCs

4、增殖，且补。肾阴(滋肾益精)方剂的作用强于补肾阳(温。肾益精)方剂。．(3)四首经典补肾方剂水提液均可促进体外培养的rBMSCs向成骨细胞分化，且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方剂。(4)四首经典补肾方剂水提液均可上调体外培养的rBMSCs中BMP．2的水平以及Runx2mRNA的表达，而且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方I中文摘要剂，这与补肾方剂水提液诱导rBMSCs向成骨细胞分化的结果相一致，提示这可能是补肾方诱导rBMSCs向成骨细胞分化的作用机制。(5)补肾阴方与补肾阳方在诱导rBMSCs增殖、分化方面表现出一定的趋向性

5、，即补肾阴方在诱导rBMSCs增殖作用方面优于补肾阳方，而在诱导rBMSCs分化方面补肾阳方优于补肾阴方，由此提示补肾阳法与补肾阴法对rBMSCs增殖、分化作用的差异可能是其产生不同治疗效果的作用机制。关键词：肾精；补肾方剂；骨髓间充质干细胞：增殖：分化南京中医药大学博：b学位论文Abstractohiecfive：Undertheguidanceof“kidneyessence'’theoryofTraditionalChineseMedicine，studytheintrinsiclinkbetweenkidneyess睨lceandbonemarrowmesen

6、chymalstemcells(BMSCs)，observeeffectionofthekidney-tonifyingrecipesonproliferationanddifferentiationofBMSCsandInvestigatethemolecularmechanismsofthekidney-tonifyingrecipesinducingproliferationanddifferentiationofBMSCsinordertoprovidetheoreticalandexperimentalbasistoexplorethescientificm

7、eaningof‘‘kidneyessence’’andtheclinicalapplicationofthekidney-tonifyingrecipes．Methods：(1)Theoreticalstudy：throughthesystemstudythe‘‘Congenitalessence'’and‘‘kidneyessence”theory,andmodernresearchresultsonsterncell，analysisthe“congenitalessence'’attributeofthestemcells，andthecor