rage在mgo诱导jurkat细胞分泌炎症因子tnfα和ifnγ中的作用

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1、1万方数据目录英文缩略词表……………………………………………………………………3中文摘要…………………………………………………………………………4英文摘要…………………………………………………………………………6前言………………………………………………………………………………8材料与方法………………………………………………………………………10结果………………………………………………………………………………19讨论………………………………………………………………………………25小结………………………………………………………………………………29结论……………………………………………………………

2、…………………30参考文献…………………………………………………………………………31致谢………………………………………………………………………………36综述………………………………………………………………………………372万方数据英文缩略词表英文缩略英文全称中文名称MGOMethylglyoxal甲基乙二醛RAGEReceptorForAdvancedGlycationEnd晚期糖化终产物受体ProductsCaMCalmodulin钙调蛋白CaMKIVCalmodulin-dependentProteinKinaseIV钙调蛋白依赖性蛋白激酶IVp38MAPKp38mitogen-acti

3、vatedproteinkinasep38丝裂原活化蛋白激酶NACN-acetyl-L-cysteineN-乙酰-L-半胱氨酸TNF-αTumorNecrosisFactor-α肿瘤坏死因子αIFN-γInterferon-γ干扰素-γFBSFetalBovineSerum胎牛血清DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜PHAPhytohemagglutinin植物血球凝集素PMSFPhenylmethanesulfonylFluoride苯甲基磺酰氟TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基乙二胺ECLEnhancedChemiluminescence增

4、强化学发光法ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫法GLO-1Glyoxalase-1乙二醛酶-13万方数据RAGE在MGO诱导Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-α和IFN-γ中的作用中文摘要目的：甲基乙二醛（MGO）是葡萄糖活性代谢产物，晚期糖化终产物受体（RAGE）可抑制MGO代谢的关键酶乙二醛酶1（GLO-1）。MGO和晚期糖化终产物受体的水平在糖尿病人中明显增高，与糖尿病加速动脉粥样硬化有关，但它们之间相互作用在糖尿病加速动脉粥样硬化中的意义仍不清楚。本课题组前期研究发现MGO诱导Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-α、IFN-γ。本实验将进

5、一步研究RAGE及其胞内信号对MGO诱导的Jurkat细胞分泌TNF-α和IFN-γ的影响，为了解糖尿病加速动脉粥样硬化机制提供了实验基础。方法：①不同浓度的MGO（0、15、30、60μM）作用PHA（0.25μg/ml）预刺激的Jurkat细胞24h，Westernblot检测RAGE表达。②不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。③不同浓度MGO（0、15、30、60μM）作用PHA预刺激的Jurkat细胞24h,

6、Westernblot测钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（CaMKIV）的表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。免疫荧光检测30μMMGO作用0、15、30、60min后的Jurkat细胞内CaMKIV转核情况；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。④30μMMGO作用PHA预刺激24h的Jurkat细胞0、15、30、60min，Westernblot检测p38MAPK磷酸化表达；部分实验加RAGE抗体（1μg/ml）预处理，同时设非特异抗体（1μg/ml）为对照。⑤30μMMGO作用于CaMKI

7、V抑制剂KN62（10μM）、p38MAPK抑制剂SB203580（25μM）预处理的Jurkat24h，ELISA检测TNF-α和IFN-γ的分泌。结果：①MGO作用于PHA预刺激的Jurkat细胞24小时，WesternBlot显示Jurkat细胞表达RAGE，15、30、60μMMGO均上调RAGE的表达，与MGO未作用组比较差异有统计学意义（P<0.05）。②15、30、60μMMGO作用