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1、SEC对淋巴细胞分泌TNF-α的诱导作用安徽医学2006年第27卷第5期SEC对淋巴细胞分泌TNF一')【的诱导作用王凡黄强周丽英[摘要]目的探讨超抗原SEC的抗癌作用机制.方法采用ELISA法测定SEC在不同浓度及作用时间促淋巴细胞分泌TNF—a的作用;采用RT—PCR法检测SEC在不同作用时间促进淋巴细胞表达TNF—a的mRNA.结果ELISA法显示:淋巴细胞在未经SEC激活之前,培养上清液中TNF—a较低,经SEC激活后的第1天,培养上清液中TNF—a迅速上升,到作用的第3天,TNF—a上升至峰值.RT—PCR显示:经SEC
2、活化的淋巴细胞有大量TNF—amRNA的表达,高峰出现于第3天.结论SEC能促进淋巴细胞大量分泌TNF—a.[关键词]金葡菌肠毒素C;超抗原;淋巴细胞;肿瘤坏死因子一aTunlornecrosisllact0lr—OtsecretionoflymphocytestimulatedbySECWangFan,HuangQ,ZhouUyingDepartmentofRadiationOncology,FirstAffiliatedHospital,AnhuiMedicalUmvershy,Hefei230022[Abstrad]Obje
3、ctiveProbetoantitumormechanismofsuperantigenSEC.Me~odsWemeasuredl'NF—ainlym-phocytestimulatedbySEC(indifferentdoseandtime)withELISAmethod;mRNAexpressionwasmeasuredbyusingRT—PCR.ResultsAPAAPshows:ThereislittleINF—abeforeusingSEC.ThelymphocytestimulatedbySECbegantosecre
4、teINF—ctgreatlyatfirstday.Secretingamountreachedpeakatthethirddayanddecreasedslowlyatthe5,7,hday;RT—PCRshows:LymphocyteactivatedhaveexpressedmRNAofl'NF—a,contrasttothis,thelymphocyteunaetivateddidnotexpressedanymRNAofeytokine.ConclusionSECCaninducelymphocytetosecreteI
5、NF—a[Keywords]Staphylococcalenterotoxin;Superantigen;Lymphocyte;Tumornecrosisfactor—a生物治疗现已被公认为除手术,放疗和化疗外的第四种肿瘤治疗手段.高聚生作为一种超抗原…,经动物实验及人体临床试验,均显示出强大的抗瘤作用.本文通过观察金葡菌肠毒素C型(staphylococ.calenterotoxinC,SEC)对淋巴细胞分泌TNF一仅的诱导作用,试图对SEC高聚生的抗瘤作用机制进行阐明.资料与方法1.仪器相差显微镜:Nikon,日本.二氧化碳培
6、养箱,ESOEC—BAN一311型,日本.离心机:LIM一2A,北京医用离心机厂.DNA热循环仪:PE公司.电泳仪:TS600,上海复旦生物工程研究所.全自动酶联免疫检测仪:HYPERION,USA.2.主要试剂SEC,沈阳协合制药厂.Ficoll—Hypaque淋巴细胞分离液,比重1.077±±0.022,上海试剂二厂.RPMI1640培养液,Sigma公司.小牛血清,杭州四季青生物工程材料研究所.RNA抽提试剂TRIZOL及cDNA合成试剂盒,GIBCOBRL公司产品.357高保真Taq酶及dNTPS,Sigma公司产品.TF
7、N一仅检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司.3.淋巴细胞的分离培养及活动取健康志愿者静脉血50na(肝素1250U),100mlPBS稀释,小心加人到等体积的淋巴细胞分离液,2000r/min离心20分钟,小心吸出中层的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcel1)层,加5倍PBS稀释,1000r/min离心5分钟,弃上清,将沉淀置于RPMI1640完全培养基(含20%小牛血清,青链霉素各100U/m1)37℃50%CO:饱和湿度下培养,在上述培养基中加人SEC,使其终浓度分别为10U/ml,5
8、U/ml,2.5U/Tnl,0u/Tnl.于用药前及用药后的第1,3,5,7天离心,收集上清液及淋巴细胞,分别置于一20℃及一80℃冰箱保存备用.4.ELISA检测淋巴细胞上清液TNF一采用双抗体夹心法,取出已平衡至室温的板条,加人标准品稀释液10
