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1、中图分类号墅学校代码§三密级公珏硕士学位论文黑素瘤分泌的对体外淋巴细胞免疫抑制作用的研究/作者姓名:柴丽娜学科专业:基础医学研究方向:病理学与病理生理学学院系、所:基础医学院指导教师:韩颖副指导教师:任素萍◇、,’论文答辩日期二鎏丝列答辩委员会主席兰獠中南大学年月原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作
2、的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名:氅亟塑日期:立虹年』月丛日学位论文版权使用授权书本入了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名:生匾卑导师签名艇日期:韭年上月丛日黑素瘤分泌的对体外淋巴细胞免疫抑制作用的研究摘要恶性黑素瘤是皮肤黑素
3、细胞系统所发生的恶性程度最高的肿瘤之一【。尽管近年来生物科学在各个领域迅猛发展,黑素瘤的临床治疗手段却没有根本的改进,死亡病例高达皮肤癌所致死亡的%‘】,因此深入分析黑素瘤的发病机制,探索有效的治疗方案非常重要。以往的研究表明,黑素瘤的发生发展与孕激素相关子宫内膜蛋白.,表达量密切相关,但是其作用机理尚不明确。本研究拟对促肿瘤发展的免疫机制进行分析和探索。又称为,最早是从人类胎盘、羊水、怀孕期子宫蜕膜中发现并分离出的一种糖蛋白。大量的研究表明,它能够抑制细胞的免疫活性,对妊娠期母体免疫耐受的建立和半相合胚胎植入起重要的调节作用】
4、。我们以往的研究发现基因在恶性黑素瘤组织和及体外培养的细胞系中高水平表达,对肿瘤细胞的迁移侵袭具有促进作用【。鉴于肿瘤侵袭和胚胎植入的相似性,我们推测存在这种可能:高表达的对细胞具有负性调节作用,使得肿瘤细胞逃脱了免疫细胞的监视和杀伤而迅速发生浸润转移。为了证明这个假设,我们从以下三方面进行了研究:。采用和检测在黑素瘤细胞系中和蛋白的表达;.利用化学合成的和重组慢病毒感染肿瘤细胞,下调的表达并通过药物筛选获得表达抑制的稳定细胞系,为下一步实验提供蛋白样品及细胞模型;.分离人外周血单个核细胞及纯化的细胞,分别将蛋白或表达抑制的肿瘤
5、细胞与淋巴细胞混合,与对照组相比观察淋巴细胞的增殖、凋亡和肿瘤杀伤功能的变化。实验结果显示:.分别从和蛋白水平证实了基因在黑素瘤细胞系的表达;.显著降低了的表达;通过慢病毒转染获得了表达抑制的稳定细胞系及非靶向对照细胞;.条件培养上清加入体外活化的淋巴细胞后,细胞增殖明显变慢,细胞凋亡比例增加;.经表达抑制的肿瘤细胞诱导的效应淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤率明显高于对照组。体外实验表明蛋白抑制淋巴细胞增殖和细胞毒作用,增殖抑制作用可能由促凋亡引起。图幅,表个,参考文献篇关键词:基因;淋巴细胞;免疫抑制;恶性黑素瘤分类号:/,【.,%.
6、,.’?.,.,.?,,,.,【..【,.’,:;?;,,,.:;动淑心,队;;,;.觑’.?.:;;;:目录原创性声明?.摘要?.?.?......?.?.?.?.?......?..??.目豸:?.符号说明前言?一表达抑制细胞系的建立.材料....主要仪器??...主要试剂??...主要液体及配制??...细胞系...和慢病毒为载体的构建.方法....黑色素瘤细胞系的培养??一。.提取和基因扩增?一..瞬时转染..检测瞬时转染后的表达?一..慢病毒介导的稳定转染黑素瘤细胞??一..检测稳定转染后的表达?...检测稳定转染后蛋
7、白水平的表达变化??...结果?...。.一和细胞表达?..能有效地降低..细胞的表达.慢病毒对..细胞有较高的转染效率?。..表达抑制稳定细胞株的建立~.讨论外周血淋巴细胞的体外培养.材料.主要仪器..主要试剂..主要液体及配制..外周血.方法..密度梯度离心法分离..的体外刺激培养..检测存活率?..免疫磁珠分选细胞.结果??...体外培养条件优化?..免疫磁珠分选细胞的得率和纯化效率?.讨论黑素瘤分泌的对细胞功能的影响.材料....主要仪器..主要试剂..主要液体及配制..外周血..细胞系.方法??....法检测的分泌表达
8、?..法检测对增殖的影响...检测对和的诱导凋亡作用?...一细胞基因测序?...细胞提取和.基因扩增??....混合淋巴细胞和肿瘤细胞反应?。..细胞毒分析?..统计学分析?.结果?....在..中的表达量?..对的增殖抑制作用?..对淋巴细胞凋亡的影响..基
