原花青素对组蛋白诱导淋巴细胞凋亡的作用及机制

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1、分类号密级＾ＵＤＣ编号讀辦＾序硕ｉ学位论文原花青素对组蛋白诱导淋芭细胞调亡的作用及化制ＴｈｅＥｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒａｅｓｅｅｄｐｒｏａｎ化ｏｃｙａｎＷｉｎｇｐ－ｏｔｏｓｓｅｘｔｒａｃｔＧＳＰＥｏｎ陆ｓｔｏｎｅｓｉｎｄｕｃｅｄａｉｓｉｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ（）ｐｐ莫冰导师姓名常平教授专业名務急诊医学培养类型全日制专业型硕：ｉ：论义提交日巧幼１５年５月南方医科大学２０１２级硕±学位论

2、文原花青素对纽童白诱导淋巴细胞调ｔ的作用及机制Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｒａｐｅｓｅｅｄｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｄｉｄｉｎｅｘｔｒａｃｏｎｈ－ｔＧＳＰＥｉｓｔｏｎｅｓｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ（）ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ课题来源：广州市科技计划（２０１４Ｊ４１００１３３）学位申请人莫冰导师姑違常平教授专业違称急诊度学培养类型全日制专业型培养层次硕击研究生所在学院第二临床區学院答辩委寅会主席于

3、化鹏教授答辩委员会委员何志捷教授林新峰教授寇秋巧教授刘占国副教授２０１５年５月２７日广州硕去学位论文原花青素对组蛋白诱导淋己细胞调亡的作用及机制硕±研究生：莫冰指导教师：常平摘要研究背景。胳毒症病死率商腺毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征，是危重一症监护病房内最常见的死亡原因么，并且发病率逐年升窩。胳毒症时免疫细。其中胞调亡及其后续的免疫抑制是导致腺毒症患者死亡的重要原因，淋己细胞在机体的免疫保护中发挥了重要的作用。已有大量研究显示

4、：腺毒症时可出现免疫器官及外周血中大量淋巴细施调亡，这些细胞的调亡又可继发严重的免疫抑制。新的研究显示，细胞外组蛋白在腺毒症发病及致死过程中发挥了重要一作用，被认为是腺毒症治疗的个潜在鞭点。我们的前期研究显示，腺毒症过程中大量释放的细胞外组蛋白可通过线粒体损伤介导淋己细胞调亡。葡萄巧原花青素（故阳）是从葡萄巧中提取的原花青素，含有大量的敢酱一基。抗氧化的多酷类化合物有个非常重要的功能，它们可［＾＾清除氧自由基，并减少膜脂质体过氧化作用。研究显示原花青素具有广泛的生物学效应，如抗氧

5、化性、抗炎及线粒体保护作化而线粒体损伤是组蛋白介导琳巴细胞损伤的重要途径，因此我们推断原花青素可能具有抑制组蛋白介导的淋巴细胞调亡作用Ｓ阳。，并通过该研究明确Ｇ对組蛋白介导淋巴细胞调亡的作用及机制研究目的１．明确原花青素是否可Ｗ抑制组蛋白诱导的淋巴细胞调亡；２．探讨原花青素是否通过清除氧自由基，ｐ３８通路和线粒体途径保护保护组蛋白诱导的淋己细胞澗亡。Ｉ＾研究方法１．分离人血琳已细胞经静脉抽取健康志愿者外周血２０ｍＬ，肝素抗凝，与ＰＢＳ等比例稀释混匀５管５ｍｌ

6、淋己细胞分离液的离也管上部，设置后平均分为，分别缓慢加入装有’也温度２０Ｃ，离也机２０００ｒｐｍ离３０ｍｉｎ，吸取中间富淋巴细胞的白膜层，经ＰＢＳ洗涂６４０一个ＥＰ管１遍离也后，用不含血清的１培养基重悬全部淋己细胞至同中，并计数备用。２满物处理１６４０淋己细胞来源于健康志愿者全血，经淋己细胞分离后，培养于培养Ｘ６液中。淋已细施分为４个组６１１０。Ｉ空白对，培养于孔板中，密度为个／孔照姐；ＩＩ组蛋白处理组（５０ｙｇ／ｍｌ）；田脚巧处理组（２Ｍｇ／ｍｌ）；ＩＶＧＳＰＥ＋组蛋白处理组

7、。虹和ＩＶ组先分别予说ＰＥ处理２小时，ＩＩ与ＩＶ组再与组蛋白５０ｕｇ／ｍＬ处理２．化。３？细胞分巧ａ）细胞活力测试－－－－－Ｃ沈８２－２－４硝基索基３４细胞生存能力用［（甲氧基）（硝基苯ｓ－－－－－１Ｘ５２４二２Ｈ．巧ｌ〇基）（，磯酸苯）四哇单钢盐］测定。将淋己细胞按密度为细胞／孔接种在９６孔板，毎孔ｌＯＯｙｌ。经药物处理后，采用ＣＣＫ８法检测细胞活为。ｂ）人外周血淋己细胞调亡的检测将处理好的人夕ｈ周血瓣己细胞ｌＯＯＯｉｐｍ离也ｌＯｍｉｎ，弃上清，加入ＩｍＬ巧Ｓ

8、－，洗涂重悬，离也，弃去上清，ＡｎｎｅｘｉｎＶｎＴＣ／ＰＩ避光脖育１５ｍｉｎ，ＰＢＳ重悬细胞后用流式细胞仪检测每管淋巴细胞的调亡率。Ｃ）线粒体内膜损伤检测ｎ硕去学位论文入罗丹明１２３将处理好的人外周血淋臣细胞离也弃去上清，加‘（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅｌ２３）染色剂至终浓度１叫如在３７Ｃ避光染色３０ｍｉｎ，阳Ｓ洗緣２遍并重悬细胞后。，流式细胞仪检测线粒体膜