恶性疟原虫基因clag9黏附功能的研究

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1、中国协和医科人学硕十生论文中文摘要疟疾是严重危害人类健康的疾病。脑型疟疾(cM)是恶性疟疾的症状之一，也是最主要的致死原因。CM的病理基础是红内期晚期滋养体和裂殖体感染的红细胞与宿主内皮细胞之间的黏附。CM所涉及到的多因素和不同机制迄今尚未阐明。前期文献检索发现，Cla99蛋白是感染红细胞与人脑微血管内皮细胞(HBMVEC)发生黏附的关键蛋白。本实验室前期实验通过生物信息学软件对Cla99进行抗原性和表面可能性分析，选取了Cla99的三个片段Cgl，C92，和c酪，利用原核表达三种多肽片段的GST融合蛋白，检测三种蛋白影响HBMVEC关键的

2、黏附相关受体细胞间黏附分子．1(ICAM．1)表达的情况，以蛋白中检测的对应内毒素剂量做为对照，结果表明，C93能够上调宿主细胞受体ICAM．1的表达。但Cgl和C92没有类似作用。由于内毒素具有很强的诱导ICAM．1表达的作用，为了更加明确Clag三个片段对于血管内皮细胞黏附功能的影响，必须去除蛋白中的内毒素。本实验的实验策略是：通过构建真核表达载体，利用哺乳动物细胞表达上述三种Cla99片段或用去除原核表达蛋白中内毒素的方法获得内毒素含量不影响血管内皮细胞表面ICAM一1表达的Cla99片段；用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)做为检测蛋白

3、黏附功能的前期实验的静态模型，在体外将蛋白与HUVEC共同孵育，用流式细胞仪检测宿主细胞表面ICAM-1表达的情况。实验结果：去除内毒素后的C93与对照组同等剂量的GST对HUVEC的作用结果无显著差异，表明C93无明显上调宿主细胞受体ICAM一1表达的作用，结合近期Cla99功能研究的相关文献，Cla99在参与疟原虫感染红细胞与血管内皮细胞黏附方面的功能可能并非通过直接作用于宿主黏附受体而实现，而是通过参与恶性疟感染红细胞表面黏附分子的转运，其功能有待于进一步研究。中国协和医科大学硕士生论文EffectofCla99onthecytoad

4、herencefunctionofmicrovascularendothelialcellYiJingDepartmentofEtiology,InstituteofBasicMedicalScience，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollegeABSTRACTMalariastillremainsaserioushealthproblem．Thereareallestimated300—500millioncasesandover1milliondeathsfr

5、ommalariaeachyear．Despitetheearlysuccessofmalariaeradicationcampaignsin1960s，thediseasehasundergonearesurgenceasaresultofresistancetothecommonlyusedinsecticidesanddrugsrespectively．Furthemmre，thevaccinedevelopmentwasfrustratedbecauseofthecomplexityoftheparasite’Slifecyclea

6、ndtheantigenicdiversity．Thesebroughtabouttherealizationthatagreaterunderstandingofthepathogenicprocessassociatedwiththediseaseisnecessaryifeffectivemodesoftreatmentorpreventionaretobefound．CerebralMalaria(CM)isthemostseverecomplicationandthemajorcauseofdeathofMalaria．Thepa

7、thogenicbasisofCMistheadherenceofthemature·stage-infectederythrocytes(IE)tohostendothelium．Ithasinvolvedmulti-factorsanddifferentpathwayswhicharestillunclear．Ourresearchs仃ategyWaStosearchbibliographyandtoanalyzethemalariagenomicdatabasebybioinforrnaticssoftwaretolookforthe

8、newadherence—associatedgenes．Moreove5detectedbythenewlyestablishedinvitromodelofcytoadher