小鼠基因imds-60cdna克隆和初步性质的研究以及附睾特异基因bin1b蛋白水平初步的研究

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1、摘要醛攀馋为避孕鼗嬷级具舂掇少瓣内分泌帮遗传副终矮，袋究瓣睾瓣凌§§及穗子藏熬避程有助于新测男性避孕药物的设计和开发。基因IMDS．60的EST首先发现于予宫，却在附犟里有较高表达。本文的工作致力于附肇中IMDS．60旗因全长cDNA的克隆和初步研究，以及附搴特吴基瓣Bintb蛋自农平夔臻关磁究，荛遂一步磅究这些基缀在瓣睾孛戆硗戆努下基缓。通过闻源EST搜索和PCR的方法，在小鼠附肇里取得IMDS一60基因带完整开放阅读框的cDNA序列，它编码的氨基酸与C130090K23Rik基因序列(来自Musmusculus，16天胚胎头部)缀秘麓氨基酸100％稳磊。Norther

2、n杂交懿德巢表饔IMDS．60mRNA在子富、瓣攀、精囊腺和胃的样品中均有表达，其中又以在附睾中的表达丰度墩高，其表达漫雄激素正调控，表达量从3周龄到成年期最高。秀了霹大鬣辫攀特髯表运静beta．defensinBinlb豹功能提袋装证，我稻跌三个方瑟逡行了研究。利用大鼠Binlb谯小鼠中的同源基因mBinlb的抗体进行免疫组化实验发现mBinlb礞白存在于附睾头部靠近体部区域，并能与小鼠糙予结合，结合信号集中在精予头部顶体后(post．acrosome)嚣竣，这与大鬣Binlb豹结台模式类叛，下～步将碜}究mBinlb是否氇键遴精子运动：构建了非附翠特异beta-def

3、ensinRBD．1的稳定转染细胞株，体外抗菌活性实验表明细胞分泌的RBD．1舆有抗菌活性，这是下一步进行大鼠Binlb与RBD．1促使精子运动的功链对跑实验作了镳垫；糖予运动甏豢c矗2+豹释放，组成ca2+释放通道的{p港豹精子结合实验显示．骐精子结合模式与Binlb有相近之处。关键词：IMDS-60，beta-defensin，Binlb，epididymis，IP3R2006年硕士学位论文小鼠基因IMDS．60的cDNA克隆与初步性质研究以及附睾特异基因Binlb蛋白水平的初步研究AbstractZhouXuan(Biochemistry＆MolecularBiol

4、ogy)Directedby：Prof．Zhang，Yong-LianPh．DEpididymis，atargettissuewithlittleincretionandheredityside-effect，isstudiedforitsfimctionandeffectontheprocessofspermmaturetodesignanddevelopanewtypemalecontraceptive．AESTofIMDS一60wasfirstfoundinuterus，buthighlyexpressedinepididymis．Ourresearchfocuse

5、donfull—lengtheDNAcloningofIMDS·60inepididymisanditsspecialityonexpression．ResearchonBinlbandrelativeproteinswasalsoincluded．Andtheseworkmaypavewaysforexplorationoftheirfunctionsinepididymis．TheeDNAsequenceofgeneIMDS一60withitscompleteORF,wasobtainedinepididymisbyESTsearchingandPCRbasedpro

6、cedures．TheaminoacidsequencecodingbyIMDS一60geneissamewiththatofC130090K23Rikgene．ThemRNAofIMDS-60expressedinuterus，aSwellasepididymis，seminalvesicleglandandstomach，speciallyhighestinepididymis．Itsexpressionwasandrogen-mgulatedandhighlightedfrom3week—oldmalemicetoadult．Inthemeantime，westud

7、iedthreeproteinstosupportOurpreviousworkonratBinlb．1)mBinlb，themtBinlbhomologyinmouse，belongstobeta—defensingenefamily．mBinlbproteinwaslocatedindistal-caputepididymisinimmunohistochemicalstaining．Anditalsoshoweditsspermbindingcapacityinpost—acrosomearea,whichwascoin