翡翠贻贝糖胺聚糖抗肿瘤活性与其免疫调节作用的研究

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1、CIassifiedIndex：T$254．4SecurityClassification：u．D．C．：664．8／．9SecurityPeriod：DissertationfortheMaster’SDegreeRESEARCHoFANTI．TUMORACTIVITYANDIMMUNoMoDULATORYEFFECToFGLYCOSAMINOGLYCANFROMCandidate：Supervisor：Speciality：Researchfield：University：Submissiondate：PE

2、RNAVlRIDIS。LiRuiProf．WuHongmianP2ngmeerlngMarianebioactivesubstanceGuangdongOceanUniversityApril2010㈣∞删e㈣0舢8Ⅲ《1㈣Y广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果

3、由本人承担。作者签名：座端、20I。年易月J7El学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于l、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密团。作者签名：导师签名：(请在以上相应方框内打“4’’)20／o年易月I7日20Io年莎月／7曰目的：以翡翠贻贝全

4、脏器为原料，优化翡翠贻贝糖胺聚糖粗品(PVG)的提取工艺条件，经初步纯化后对其抗肿瘤活性进行研究，并探讨其在免疫调节作用方面的抗肿瘤机理。方法：1．采用二次回归『F交旋转组合设计研究料液比、加酶量、酶解时间3个因素对糖胺聚糖粗品得率与糖胺聚糖含量乘积的影响，从而确定翡翠贻贝糖胺聚糖半}l品(PVG)提取的最佳工艺条件。2．将粗品溶解后，调整溶液pH值，使大部分蛋白沉淀后，冷冻干燥得精制品(PVG．1)，DEAE．52．纤维素纯化PVG．1得到翡翠贻贝糖胺聚糖纯化品(PVG．1a)3．采用最大耐受剂量实验对PVG

5、一1的急性毒性进行检验。4．MTT法检测PVG．1和PVG．1a对体外培养的K562慢性髓性白血病细胞、CNE．2Z人鼻咽癌细胞和S180骨肉瘤细胞的抑制作用，并探讨PVG．1和PVG．1a对5．Fu的增敏作用；在体外实验基础上，体内实验验证PVG．1对S180移植瘤的抑制作用。5．采用计算免疫器官指数法检测PVG．1对讵常小鼠、免疫抑制小鼠及荷瘤小鼠的脾指数、胸腺指数的影响；检测PVG、PVG．1、PVG．1a体外对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红及产生一氧化氮(NO)能力的影响；通过脾细胞增殖实验检测PVG、PV

6、G．1、PVG．1a体外对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响；通过脾淋巴细胞与K562肿瘤细胞的共培养，体外检测PVG、PVG．1、PVG．1a对自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响。结果：1．获得了翡翠贻贝糖胺聚糖提取的最佳工艺组合：液料比2．30：l、加酶量0．94％、酶解时l、日J3．46h，模型预测值为25．50(×104)，重复验证实验结果与预测值的标准误差为1．10％，低于5％。重复验证实验糖胺聚糖粗品平均得率为0．99％，糖胺聚糖平均含量为26．04％。2．经过初步精制和离子交换柱层析纯化，翡翠贻贝糖胺聚糖的

7、含量逐步提高，精制品PVG．1中糖胺聚糖含量为45．6％；经柱层析后的纯化品中糖胺聚糖含量为59．4％。3．最大耐受量实验结果显示，翡翠贻贝糖胺聚糖精制品PVG．1对小鼠的经口急性毒性剂量大于15．0g·kg～。4．(1)PVG．1对K562慢性髓性白血病细胞、CNE．2Z人鼻咽癌细胞的生长有抑制作用；PVG．1和PVG．1a对体外培养的S180骨肉瘤细胞的生长有显著抑制作用；PVG．1、PVG．1a与5．Fu合用可以增敏5．Fu的抗肿瘤药效。(2)PVG一1对小鼠体内$180移植瘤的生长具有显著抑制作用，20

8、0mg·kg。1的PVG一1的抑制率达到60．6％；CTX与PVG．1合用组的抑制率达到I78．8％，显著提高了CTX的抑瘤效果。5．(1)PVG．1能够提高正常小鼠脾指数和胸腺指数，200mg／kg剂量PVG一1对J下常小鼠脾指数的提高最明显，100mg／kg剂量PVG—l对对证常小鼠胸腺指数的提高最明显：PVG．1能够修复由CTX引起的小鼠免疫低下状况。(2)PVG．1各剂量组都能