猪肉组织中β2受体激动剂残留检测方法的研究

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1、山东人学硕士学位论文摘要B2-受体激动剂是一类苯乙胺类药物，起初主要在临床上用于治疗支气管哮喘、痉挛，阻塞性肺炎等症状，后来发现当把较大剂量的此类药物添加到饲料中时，会大大提高动物的瘦肉转化率，具有营养再分配的作用。若长期食用含有B：．受体激动剂残留的食品就会发生头痛，胸闷，恶心等不良反应，因此欧盟和我国先后都颁布法令禁止在畜禽生产中使用该类药物。本研究旨在建立猪肉中62-受体激动剂残留的超高效液相色谱串联质谱(UPLC．MS／MS)确证方法和表面等离子生物传感器(SPR．biosensor)的筛选方法。UPLC．MS／MS方

2、法：称取2．Og匀质的样品经酶解后，用高氯酸：甲醇(9：l，v／v)混合溶液除蛋白后，经混合型的PCX柱净化，氮气吹干后，使用初始的流动相定容到2．0mL。最后经过超高效液相色谱电喷雾串联质谱检测。结果表明，本方法有效的减少了离子抑制现象，沙丁胺醇，莱克多巴胺，盐酸克伦特罗三种62-受体激动剂的平均回收率都在85％以上，相对标准偏差(n=3)在2．3．11％范围内，方法检出限在0．07-0．12／zg／kg，定量限在0．22-O．38／Mg／kg。SPR生物传感器方法：样品经高氯酸提取，乙酸乙酯净化后，通过分别固定抗原和抗体优

3、化了SPR检测方法，并对缓冲液，再生溶液进行了优化，建立了猪肉中莱克多巴胺的SPR生物传感器抑制免疫残留检测方法，该方法对莱克多巴胺的检出限为0．6／Mg／kg，在1、2和4／比g／kg三个浓度添加水平下，平均回收率为81％一102％，相对标准偏差均在10％以内。本方法简单快速，检测时问为．5．0min，与ELISA方法比较，抗体无需标记。在相同的前处理条件下，与UPLC．MS／MS相比，虽然检测限较高，但回收率和精密度都较好，并且受样品基质的影响小。特别适合大量样品的快速筛选。与国外方法相比，本研究采用中国科学院自行研制的S

4、PR．2004生物传感器及芯片成本低，抗基质干扰能力强，具有广泛的应用前景。本研究所建立的两种检测猪肉中82-受体激动剂残留检测方法，样品处理简单，去除基质干扰能力强，回收率、精密度以及方法精密度都较好，UPLC．MS／MS方法，适合样品的确证分析。SPR生物传感器方法，特别适合大量样品的快速筛选工作，而且成本较低，可以用于工厂，超市，集市等场所的质量控制。山东大学硕士学位论文关键词：超高效液相色谱串联质谱；表面等离子体共振生物传感器；B2．受体激动剂；猪肉；残留II山东大学硕二lj学位论文ABSTRACTB2-agonist

5、saresyntheticphenethanolaminecompoundsasbronchodilatoryandobstructivepneumonitisagentsinhumanandveterinarymedicine．However，thesedrugsareoftenmisusedasgrowthpromotersfortheirfunctioningrowthratesenhancementandfeedefficiently．Meatproductscomingfromtreatedanimalsmightb

6、eapotentialthreatforconsumerhealthandcauseheadache，chesttightness，nauseaandotheradversereactions．SotheuseofB2一agonistsasgrowthpromotersincattleisbannedintheEUandourcountry．Inthisresearch，confirmatorymethodofultraperformanceliquidchromatography／massspectrometry／masss

7、pectrometry(UPLC-MS／MS)andscreeningmethodofsurfaceplasmonresouance(SPR)biosensormethodwerestudied．UPLC—MS／MSmethod：Afterenzymatichydrolysis，a2．0ghomogenizedporksampleWasextracted，withperchloricacid-methanol(9：l，V：V)toprecipitateprotein，andthencleanedbymixed-modeBond

8、ElutPlexaPCXsolidphaseextraction(SPE)cartridges．Finally，theevaporatedextractwasreconstitutedto2．0mLwithinitialmobilephase．Theanalyteswered