肝癌hepg2细胞ier5基因高表达细胞系的建立与其辐射效应研究

《肝癌hepg2细胞ier5基因高表达细胞系的建立与其辐射效应研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、J●1—一目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立及其辐射效应研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1U材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯39讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43综述早期反应基因IER5的国内外研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55【帐摘要1㈣啾肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立及其辐射效应研究摘要原发性肝癌(简称肝癌)是我国常见恶性肿瘤，新发肝癌病例中55％在我国，诊治形式十分严峻，临床研究证实

3、三维适形放疗是肝癌治疗的有力武器。辐射敏感性是影响肿瘤放疗效果的重要因素，辐射敏感与辐射敏感基因有关。如果某基因在辐射后出现表达变化，这种表达变化能够促进肿瘤细胞凋亡或抑制肿瘤细胞生长，那么该基因就可能为肿瘤的辐射敏感基因。本课题组的前期研究显示：辐射可引起早期反应基因IER5mRNA表达上调，人肝癌细胞IER5基因对辐射异常敏感，在4Gy辐射后其mRNA水平为未辐射细胞的11．54倍。国外文献揭示IER5基因与细胞分裂、细胞凋亡有关。这就提示我们IER5基因可能与肝癌的辐射敏感性有关。本研究旨在探索IER5基因在肝癌发生发展中的生物学功能及其辐射敏感性。为了深

4、入研究肝癌细胞IER5基因的辐射生物学功能，就有必要探索IER5基因高表达及基因沉默对细胞辐射效应的影响。稳定高表达(定义)是指将外源基因导入靶细胞的技术，常用的基因转染技术是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。建立稳定的细胞系，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，对靶细胞进行筛选，最常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)，筛选后得到稳定表达外源基因的单克隆细胞。本实验以人肝癌HepG2细胞为研究对象，构建IER5基因高表达细胞系，研究IER5基因在肝癌发生发展中的生物学功能

5、及辐射效应。同期实验组其他成员采用RNA干扰技术，转染HepG2细胞，建立IER5基因表达扣J$JJ细胞模型，研究基因表达抑制后对应参数的变化。两者对比结合，从基因水平探索IER5基因与肝癌辐射有关的生物学功能，探求IER5基因是否为肝癌的辐射敏感基因，能否成为肝癌放疗中一个潜在增敏靶点，为今后分子靶向治疗药物的研发提供理论指导。目的：本课题选择离体肝癌HepG2细胞作为研究对象，采用稳定转染筛选单克隆技术，转染HepG2，建立IER5基因过表达细胞模型，探讨中文摘要IER5基因过表达对HepG2细胞增殖、细胞周期、辐射效应及细胞凋亡的影响，进一步探讨该基因的生

6、物学功能，探求该基因是否为肝癌的辐射敏感基因。方法：1IER5基因高表达细胞系(IER5．overexpression．HepG2)的建立：设计特异性表达IER5基因的质粒，利用脂质体介导基因转染的技术，转染HepG2细胞，建立IER5基因高表达细胞模型，通过G418筛选与单克隆细胞的培养，形成了具有IER5基因高表达的单克隆HepG2细胞系，即IER5．overexpression．HepG2细胞系。同时设阴性对照(HepG2．Contr01)，即将与人类编码基因序列无同源性的片段与载体连接转染细胞。采用WesternBlotting技术检测HepG2细胞IE

7、R5蛋白质的表达，筛选有效的IER5基因过表达的单克隆细胞系(据挑选单克隆细胞时的备份号将细胞编号为HepG2—10、HepG2—11、HepG2—15、HepG2—20、HepG2-24、HepG2-21)。2研究IER5基因高表达对HepG2细胞增殖、细胞周期和辐射效应的影响：检测0Gy、2Gy、4Gy辐射情况下肿瘤细胞生长曲线，以及0Gy、2Gy、4Gy辐射情况下细胞的周期及细胞凋亡(采用流式细胞术)。结果：lIER5基因高表达细胞模型(IER5．over-expression．HepG2)的建立：经WesternBlotting技术检测显示：相对于Hep

8、G2．Control及其