hmgb1调控白血病细胞自噬以及化疗耐药的实验研究

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1、博士学位论文中文摘要高迁移率族蛋白-1(highmobilitygroupboxl，ⅧⅥGBl)是一种保守的非组蛋白核蛋白，在稳定染色质的结构与功能及基因转录调控中起着重要作用。白血病是儿童最常见的恶性肿瘤。自噬是一种紧密调节的溶酶体依赖性的细胞代谢途径，在肿瘤细胞的生长、浸润及防治中发挥重要的调控作用。然而，自噬在白血病细胞中的作用以及与白血病肿瘤耐药的关系，尚未完全阐明。首先，本研究发现}玎ⅥGBl参与调控白血病细胞化疗耐药的形成。化疗药物(例如，长春新碱【VCR】、阿霉素[ADM】、阿糖胞苷【Am—C】、三氧化二

2、砷【AS203】)诱导人类血液肿瘤细胞系(人原髓细胞白血病细胞系n．60和人T细胞白血病细胞系Jurkat)显著释放HMGBl。进一步，通过基因转染技术降低皿．60和Jurkat细胞中瑚ⅥGBl的表达，减少了ⅧⅥGBl释放，增加了白血病细胞对VCR、ADM、心a—c、AS203的药物敏感性；通过ⅧⅥGBl纯化蛋白预处理甩．60和Jurkat细胞，增加了白血病细胞的化疗耐药性；而且采用HMGBl小分子抑制剂(例如，槲皮素)或者HMGBl特异性中和抗体处理细胞，抑制了HMGBl释放以及随后增强化疗药物的敏感性。因此，ⅧⅥG

3、Bl是一种促存活的蛋白，化疗药物诱导m江GBl释放促进了细胞存活和白血病化疗耐药的形成。其次，本研究发现删GBl通过活化自噬来发挥其增强白血病细胞化疗耐药性的作用。一方面通过RNA干扰降低关键自噬基因博士学位论文中文摘要Beclin1的表达或者通过自噬抑制剂(例如，巴佛洛霉素A1)干预自噬潮的形成，能够逆转ⅧⅥGBl介导的白血病化疗耐药性，恢复化疗药物敏感性，提示自噬介导了蹦GBl诱导的耐药性；另一方面随着外源性蹦GBl作用白血病细胞时间的延长，自噬相应显著增加，表现为自噬标志蛋白LC3．II表达增加以及形态学上观察到

4、LC3点状聚集物的形成以及自噬小体以及自噬溶酶体等显微结构的增加，以及自噬底物p62的降解。最后，本研究发现P13K．姬K．ERK信号途径参与了蝴以GBl诱导的白血病细胞自噬。通过RNA干扰或抑制剂(例如，3．MA)降低P13K．III的表达或活性，明显抑制了ⅧⅥGBl诱导的白血病细胞中LC3．II表达及p62的降解；此外，进一步发现，抑制P13KC3的表达阻断了}玎ⅥGBl诱导的白血病细胞EIⅨ1／2磷酸化；通过鼢忱干扰或抑制剂(例如，U0126)阻断姬K．ERK信号途径，明显抑制了ⅧⅥGBl诱导的LC3．II表达及

5、p62的降解。综上所述，化疗药物诱导白血病细胞释放ⅧⅥGBl，H】ⅥGBl进一步促进自噬的形成，过度活化的自噬增强了化疗耐药的发生，并且ⅧⅥGBl主要通过活化P13KC3．脏K．ERK信号途径来调节自噬。本研究揭示了蜘ⅥGBl在白血病中的作用新机制，为细胞自噬的研究开辟了新的领域，为寻找白血病的治疗提供了新的思路与实验线索。关键词HMGBl，白血病，自噬，化疗耐药II博士学位论文英文摘要Highmobilitygroupbox1(HMGB1)，ahighlyconservednuclearprotein，isimpor

6、tantintheregulationofstabilizingthestmctureand向nctionofchromatinandgene仃anscription．LeukemiaisOneofmemostcommonmalignamtumorsinchildren．Autophagy，atightlyregulatedlysosome-dependemcatabolicpath、7~ray，isimportantintheregulationofcancerdeVelopmentandpro黟essionandi

7、ndetemliningtherespopseoftumorcellstoanticancermerapy．HoweVer，meroleofautophagyinleukemiastillremainslargelyunlmown．Firstly，wefoundthatHMGBlinvolVedinthedrugresistaIlcemechanismsinleukemia．LevelsofHMGB1expressionweresignificantlyhighincellculturesupementsofhuman

8、leukemiacancercelllines(acutepromyeloc舛icleukemiaceUHL-60andthehumanJurkatTleukemiacells)followingtreatmentwithVincristine(VCR)，adriamycin(ADM)，cytosinearabinoside(A』