s100a8对白血病细胞自噬和耐药性影响的研究

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1、中图分类号BZ2UDC610硕士学位论文学校代码!Q5圣三密级公开S100A8对白血病细胞自噬和耐药性影响的研究TheroleofS100A8onAutophagyandDrugResistanceinLeukemiaCells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期立型垄p且幽曾佩临床医学儿科学湘雅医院曹励之教授中南大学二O一三年五月答辩委员会主鹾融原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：卑日期：丝年三月笪日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》

3、，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：监导师签】：旦兰年上月笪日本课题受以下基金资助1．国家自然科学基金青年基金项目：S100A8通过自噬相关型号通路调控白血病耐药的分子机制研究项目批准号：811003592．国家自然科学基金面上项目：HMGBl调控白血病细胞自噬的分子机制及结构基础II项目批准号：30973234S100A8对白血病细胞自噬和耐药性影响的研究摘要目的：探讨人S100钙结合蛋白A8(humanS100calciumbindingproteinA8，S100A8)对白噬的影响和白血病细胞耐

4、药性影响的研究。方法：本研究首先收集近3年本院诊断的急性白血病患儿的骨髓单个核细胞(BoneMan．owMononuclearCells，BMMCs)及血浆标本，通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)和蛋白印迹法(WestemBlotting，WB)检测S100A8蛋白的表达情况；同时选用不同的白血病细胞株，噻唑蓝(MTT)法检测其半数抑制浓度(50％concentrationofi11hibition，IC50)，得出不同细胞株对化疗药物的耐药程度，

5、采用RealtimePCR、WestemB10tting方法检测S100A8在不同白血病细胞株的表达情况，探讨S100A8与白血病细胞化疗耐药性的关系；同时通过基因转染、ImAi技术、WestemBlotting、RealtimePCR、透射电镜及MTT方法等方法检测S100A8是否通过调节白血病细胞的自噬影响其化疗耐药性。结果：①发现初治／复发组明显高于完全缓解组、正常对照组(木尸

6、R、K562／A02)中的表达较非耐药细胞株(K562、甩．60和Jurkat)显著增高(n=3，氏O．05)。④抑制SlooA8表达，可以使化疗药物处理后的白血病细胞存活率下降，使细胞凋亡率增加；同时，抑制IIISlOOA8后P62表达上调而LC3．I／II表达下调，透射电镜进一步说明白噬受到抑制；⑤上调S100A8表达能促进自噬泡的形成，增加LC3．II、Beclinl表达及降低P62的表达。此外，沉默K562细胞中P13KC3、Beclin1，A魄7的表达，能抑制上调S100A8所诱导的LC3．II的形成

7、，以及阻止P62的下降，并且能使阿霉素和长春新碱处理后的白血病细胞存活率显著下降。结论：S1ooA8参与了儿童白血病的发病且与病程相关，其表达与白血病细胞化疗耐药性密切相关，SlOOA8通过调控自噬影响白血病细胞的化疗耐药性，为寻找白血病的靶向性治疗提供了线索和科学依据。关键词：S100A8；自噬；白血病；急性；耐药性分类号：R72IVTheRoleofS100A8onAutophagyandDrugResistanceinABSTRACTLeukemiaCellsObjectiVeToinVestigatet

8、her01eofS1OOcalcium-bindillgproteinA8(hWnanS1oocalci啪bindingproteinA8，S1OOA8)onautophagyanddmgresistanceinLeukemiaCells．MethodsFirstly，proteinexpressionleVelsinbonemarrowmononuclearcells(BMMCs)a