脑血管痉挛缝隙连接重构的实验研究论文

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1、摘要摘要目的：前期研究表明，缝隙连接(cJ)参与了自发性蛛网膜下腔出血(SAH)后的脑血管痉挛(CVS)。本课题拟进一步从组成GJ的连接蛋白(Cx)上探讨SAn后Cx在表达数量、类型及其分布等参与CVS的变化与作用。为进一步明确脑血管痉挛发病机理及治疗开辟新的途径。。方法：1、建立兔二次san后cvs模型：新西兰大白兔3％戊巴比妥钠(1ml／kg)麻醉后，枕大池穿刺注射未肝素化新鲜自体动脉血(0．8ml／kg)，清醒后正常喂养，24h后二次重复注血。2、动物CVS模型的观测：按照不同时相分组，在建立模型前及建立模型后的1d、3d、5d、7d、14d时行两次

2、DSA造影，比较各时相基底动脉直径的变化；二次造影后，在不同时相(Od、ld、3d、5d、7d、14d)，经心脏行全脑灌注固定作HE染色，光镜下观察血管壁组织形态学的变化。其中0d为正常组，不作任何处理。3、不同GJ蛋白表达的变化：各组动物在行DSA造影后处死取脑，分离脑动脉，提取总蛋白，WesternBlotting技术分别检测脑动脉Cx43、Cx45、Cx40、Cx37表达的时相性变化。4、脑动脉Cx43分布的变化：二次造影后，经心脏脑灌注取脑，经固定、包埋、切片等步骤行免疫组织化学技术，检测脑小管径动脉Cx43分布变化。结果：1、成功建立兔二次SAI

3、l后CVS模型：DSA造影显示注血后第1d时即出现血管狭窄，第7d时达高峰，第14d时缓解。光镜下可见痉挛的血管内皮细胞核染色质聚集，内弹力膜呈显著波纹状，平滑肌细胞分布稀疏，周围红染组织明显增多，核长梭形，内弹力膜与平滑肌层间有水肿。2、脑动脉不同类型Cx蛋白数量表达变化：脑动脉血管壁在SAIl后Cx43、Cx45蛋白表达显著上调，并呈时相性变化，其中Cx45第5d达到高峰(P

4、。Cx45、Cx43、Cx37Ⅱ摘要蛋白表达的时相性变化同建立脑血管痉挛模型后基底动脉直径的时相性变化相比，相关系数分别为-0．847、-0．865、-0．934，与同基底动脉直径的时相性变化均存在直线关系。3、脑动脉GJ分布变化：在正常脑血管外膜成纤维细胞及内皮细胞上可见少量Cx43表达，而在平滑肌细胞上未见表达；在SAH后7d，Cx43表达显著变化，在平滑肌细胞上可见大量表达，同时在成纤维细胞及内皮细胞上可见表达增多。结论：1、多种GJ蛋白表达发生了改变，进一步表明GJ参与了SAH后CVS的发生。2、SAIl后，GJ蛋白的表达类型、数量及分布均发生了改

5、变，表明CVS时GJ发生了重构，重构导致细胞间信息传输发生改变，这可能是导致CVS发生的病理基础。关键词：缝隙连接；重构；脑血管痉挛；Cx37；Cx40；Cx43；Cx45IllABSTRACTobjective：PreliminarystudiesshowthatgapjunctioninvolvedinCVSafterSpontaneousSAH．T11issubjectofinstructionmovesforwardtoinvestigatingCXwhichistheelementofGJ．撇isinordertoshowtheexpressio

6、nofCXintheamount．typeanddistributioninvolvedincerebralvasospasm(cvs)changesandfunctionafterSAH，whichisgoodforclarifyingthepathogenesisofCVSandopenupanewwayfortreatment．Motheds：1．Establishingrabbit’SCVSmodelaftersecondarySAH：Cisternpunctureinjectfreshnon-heparinizedautologousarteri

7、alblood(0．8mllkg)afterusing3％Pentobarbitalsodium(1ml／kg)toanaesthetizetheNewslandⅥ％terabbit．Wegiveitnormalfeedingwhenitisawaked，andtheninjectingbloodrepeatedly24H’Slater．2．ObservationofanimalCVSmodel：settingupgroupaccordingdifferentphases．Doingtwotimes’DSAangiographyafterandbefore

8、establishingthemodel’Sld，3d，5d，7d