大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛后缝隙连接形态学检测

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3、对比脑基底动脉直径的改变。应用激光扫描共聚焦显微镜、电镜等技术观察大鼠蛛网膜下腔出血脑血管痉挛前后脑基底动脉各层中Cx43和Cx40表达的改变及其缝隙连接超微结构特征，进一步探讨大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛发生机制及其缝隙连接在其中可能发挥的作用。方法：1、选以成年SD大鼠(南昌大学医学院动物科学部提供)作为模型动物，采用经枕大池二次注血建立蛛网膜下腔出血脑血管痉挛模型实验方法。2、CVS模型检测：采用脑血管浇铸法分别测定正常组和SAH3d、7d、14d组大鼠基底动脉直径来证实脑血管痉挛(CVS)的存在。3、本实验应用激光扫描共聚焦显微镜观

4、测缝隙连接蛋I兰tCx43和Cx40在脑基底动脉管壁各层分布情况，应用程序图象对将其所得数字化图像进行计算机中进行处理分析。对缝隙连接蛋1刍Cx40和Cx43像素密度和其荧光斑面积的大小的进行准确测定，并将应用所获得的图像素密度和荧光斑面积大小来代表Cx40和Cx43的数量，从而达到对其进行准确定量分析目的。4、应用扫描电镜和超薄切片研究方法观察大鼠SAH后脑血管痉挛前后缝隙连接(GJ)的形态学特征。结果：1、实验过程中大鼠的死亡率18％左右，大多数死亡均发生在首次枕大池穿刺造模和二次枕大池穿刺注血造模时。成功建立大鼠可靠蛛网膜下腔出血(SA

5、H)后脑血管痉挛(CVS)动物模型，成功建模后的大鼠出现不同程度的肢体瘫痪、不能正常行走、精神萎靡、畏光、卷缩等表现。成功造模后颅内SAId血凝块大部分分布在基底池、环池、端脑表面沟回、鞍上池等处。大多数大鼠48小时后行二次经枕大池注血造模穿刺时即可见穿刺针头发现有血性脑脊液流出，这也间接说明SAH模型制造成功，成功率一般均≥92％上。2、利用脑血管浇铸法分别测定正常组和SAH3d、7d、14d组大鼠基底动脉摘要直径来证实脑血管痉挛(CVS)的发生；与正常组相比较，SAH3d、7d组大鼠基地动脉直径明显缩小、可见管壁不同程度增厚，而14d组中

6、大鼠脑基底动脉直径变化不明显更接近正常组。3、a、正常大鼠组中在脑基底动脉内皮、血管外膜和平滑肌层表达少见上主要以表达Cx43为主。b、当CVS后CVS大鼠脑基底动脉Cx43在平滑肌中表达明显增加。C、正常情况下Cx40主要存在于平滑肌层，但CVS后Cx40平滑肌中表达亦增加但不如Cx43增加明显。4、电镜下可见正常组中大鼠脑基底动脉血管呈典型的三层结构(外膜层、梭型平滑肌层和平滑的内膜层)排列整齐；大鼠基底动脉单层扁平状血管内皮细胞光滑，层次排列正常、管壁无增厚、余无异常改变。连续单层覆盖于内弹力上，细胞核呈锤状，细胞核膜边缘清晰；外膜细胞

7、核梭形、光滑。而在SAIl实验组大鼠基底动脉管壁检测到了阳性的病理性改变：SAH后第3、7和14天分别均可见血凝块附着，管壁内皮细胞变性、核固缩、细胞之间融合、部分甚至坏死、脱落、细胞间隙增宽；内弹力膜层增厚，线粒体变形，平滑肌细胞缺乏典型的梭形形态，弹力纤维层扭曲变形消失、细胞外膜增厚，以上各细胞之间以及细胞均发现有缝隙连接存在。本研究还发现无论正常组还是异常组血管外膜、内皮细胞之间和平滑肌细胞三层细胞之间都存在缝隙连接，但有意义的是SAH时这些缝隙连接通道的数量明显增加。结论：1、SAH后CVS的发生与脑血管的病理改变持续存在密切相关；2

8、、正常情况下Cx43主要分布在细胞内皮和血管外膜而Cx40主要在血管平滑肌层表达；3、蛛网膜下腔出血(SAll)后脑血管痉挛(CVS)时Cx43和Cx40表达都发生