ad-polya-promoter-hil-24对肺癌细胞抑癌增效和化疗增敏体外实验的研究

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1、Ad—polyA—promoler-hIL一24对肺癌细胞抑癌增效和化疗增敏的体外实验研究中文摘要目的：研究携带ML．24(人白细胞介素24)基因腺病毒载体对NCI．H460肺癌细胞体外抑癌增效及化疗增敏作用。方法：采用本室已构建的携带hIL．24基因表达的重组复制缺陷型腺病毒载体(Ad．polyA．promoter-hlL．24)感染QBI．293A细胞，并用该细胞进行病毒扩增和效价测定，用RT-PCR法鉴定IL．24基因转录。用50MOI的Ad．h／L．24作用于体外培养的人肺癌细胞NCI．H460，用RT-PCR法鉴定IL．24的转录；用MTT法评价Ad．hIL．24对细胞生长的影

2、响，绘制出细胞生长曲线。通过流式细胞术(FCM)检测Ad．hIL．24对NCI．H460细胞细胞凋亡及周期的影响。用RT-PCR法分析凋亡相关因子Bax，Bcl．2，Caspase3及Survivin的变化，探讨Ad．ML．24诱导肺癌细胞凋亡的主要机理。用Ad．hlL．24联合化疗药物顺铂(DDP)观察其对肺癌细胞化疗的增敏作用。MTT法检测两者联合作用后对NCI．H460细胞的生长抑制作用，流式细胞术检测其对NCI．H460细胞凋亡及周期的影响。结果：Ad．hlL．24可在QBI．293A细胞中增殖，48h后在倒置显微镜下可见细胞变圆，呈葡萄状聚集，倒置荧光显微镜下可见绿色荧光，呈现

3、高感染效率。RT-PCR检测可见IL．24基因成功转录。病毒效价为108pfu／ml。Ad．hlL．24作用NCI，H460细胞后，RT-PCR结果显示目的基因可在NCI．H460细胞中成功转录，并能显著抑制NCI．H460细胞的生长，并呈现时间依赖性。该基因可诱导Gl期减少、G2／M期阻滞和凋亡，其机制可能与Caspase3／survivin和Bax／Bcl．2比值升高有关。其凋亡机制与活化的Caspase3基因水平和Bax／Bel．2比值升高有关。Ad．hlL．24感染NCI．H460细胞后，其基因对NCI．H460细胞具有明显的生长抑制作用和诱导细胞凋亡效应，具抑癌功能，Ad．po

4、lyA-promoteroML．24联合顺铂(DDP)，对NCI．H460细胞的生长抑制率和诱导细胞凋亡率均明显优于单一基因组和单一DDP化疗组，具有化疗增敏作用。结论：重组腺病毒Ad．polyA．promoter-hlL．24具有抑制NCI．H460肺癌细胞生长和诱导凋亡的抑癌和化疗增敏作用，可能是一种有效的肺癌基因治疗载体。关键词：腺病毒；hlL．24；肺癌；基因治疗；化疗增敏作者：谭启秀指导老师：赵军英文摘要Ad．polyA．promoter．hIL-24对肺癌细胞抑癌增效和化疗增敏的体外实验研究J一_·●●-■●●●●』一lGrowthSUDDresslonandCnem0Sen

5、SltlVltV0llungcancercellsinducedbyrecombinantadenovirus。。IL‘‘‘vitroexpressingh-24invitrolLAbstractObjective：Tostudythegrowthsuppressionandchemosensitivityoflungcancercells(NCI-H460)inducedbyrecombinantadenovirusexpressinghlL-24(ad-polyA-promoter-hIL-24)invitroanditsmechanism．Methods：Recombinantre

6、plication··incompetentadenovirusexpressinghlL··24(Ad-polyA—promoter-hIL-24)wasconstructedandtransfectedintoQBI-293Acells．TheadenovimscompletedtheamplificationinQBI-293Acellsandthetitrationwasalsodetected．Theexpressionofh]L-24inQBI一293AcellswasidentifiedbyRT-PCR．AfterthecollectionofAd-polyA-promot

7、er-hlL-24，weuseitinordertoinfectthehumanpulmonarycarcinomacelllineNCI-H460invitro．ThetranscriptionofobjectivegenewasdetectedbyRT-PCR．TheinfluencesofcellgrowthwhichmadebyAd-polyA-promoter-hIL-24weretestedbyMTTessay，andd