抑癌汤对人肺癌NCIH446细胞增殖抑制作用的体外实验研究

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1、抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究作者：李亚娜，葛正行，杜进军，杨秀萍【摘要】　　目的通过自拟方抑制癌汤对人肺癌NCI-H446细胞株进行干扰研究，探讨其增殖抑制作用。希望从苗药中药组方中找到抑制肺癌细胞增殖的新方法。方法将NCI-H446细胞进行培养，绘制NCI-H446细胞生长曲线，取处在对数生长期的NCI-H446细胞进行实验。首先确定抑癌汤的作用浓度范围。取细胞的存活率为50%时的药物浓度范围作为抑癌汤的给药浓度参考。再将抑癌汤在该浓度范围内分为5个浓度组；实验分抑癌汤组、西药组、抑癌汤加西药组、空白组四组、每一组各4个复孔，进行对照研究。结果抑癌汤对NC

2、I-H446细胞毒实验得到细胞存活率50%时的药物浓度范围在1～100μg/ml之间。抑癌汤加西药组优于抑癌汤组；抑癌汤加西药组优于西药组；西药组优于抑癌汤组；抑癌汤组优于空白组；抑癌汤加西药组优于空白组；西药组优于空白组。结论抑癌汤在体外对人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞具有抑制作用，具有潜在药用价值，值得进一步深入研究。【关键词】自拟方　抑癌汤　肺癌　NCI-H446细胞株　增殖抑制作用12原发性支气管肺癌（primarybronchogeniccarcinoma）肿瘤细胞起源于支气管粘膜或腺体，是最常见的肺部原发性恶性肿瘤。目前肺癌中医治疗主要用于以下几个方面：①对于分化较好的非小

3、细胞肺癌不能手术或术后、放疗后复发者，单用中医药治疗可获比放、化疗较好的效果；②配合手术、放化疗，起到减毒增效作用，即减少毒副反应，提高疗效；③晚期肺癌西医无特殊治疗者，应用中医药可改善症状，提高生存质量，延长生存期，并在抗复发转移方面有一定的优势。苗族医药是苗族人民在长期生产和生活实践中与疾病作斗争的经验总结和智慧结晶。苗医药认为癌是由于致癌恶毒引起细胞异常增生和变性的恶毒病症。为了从中药、民族药中寻找能抑制肺癌肿瘤细胞增殖的药物，我们开展由中药、苗药组成的抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞株进行干扰研究。现报道如下。　　1材料　　1.1苗药中药处方八月扎20g，白花蛇舌草20g，半枝莲

4、20g，三尖杉20g，白英20g，石见穿20g。　　1.2阳性对照药物金喜素（注射用盐酸托泊替康），贵州汉方制药有限公司，批准文号：国药准字H20000428规格：2mg/瓶。　　1.312人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞株人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞株购买于南京凯基生物科技发展有限公司，培养要求：贴壁培养：　　培养基：RPMI-1640+10%小牛血清+1%双抗消化液：0.25%胰蛋白酶冻存液：胎牛血清：DMSO=9：1培养条件：二氧化碳培养箱：5%CO2，37℃　　2方法　　2.1给药方法　　2.1.1苗药中药组方煎煮和灭菌方法首先将待煎的药物用冷水浸泡30min，加水以浸泡后

5、淹没药材2～3cm为度。称取药物重量约120g，使用砂锅煎煮。煎煮用武火煎至微沸，再用文火煎煮，煎煮时间是以文火煎煮时间考察的，煎煮30min。为了充分利用药材，避免浪费，更好发挥药效，煎煮两次。煎煮时应当注意搅拌。再将两次煎煮好的汤药倒在一起，进行浓缩。将浓缩好的抑癌汤经过纱布、滤纸过滤，得到汤药约12012ml。即得到抑癌汤生药浓度为1g/ml。再经过高压消毒锅灭菌，4℃冰箱存放备用。　　2.1.2金喜素（注射用盐酸托泊替康）人体每日用量：1.2mg/m2　　2.2人肺小细胞肺癌NCI-H446细胞的培养　　2.2.1细胞鉴定对收到的细胞株进行鉴定，由专职病理老师在倒置显微镜下观察鉴定

6、，并结合南京凯基生物科技发展有限公司提供的细胞资料，鉴定为NCI-H446细胞株。细胞株收到后，细胞培养瓶完好无损，培养液无外渗，培养液无混浊。在倒置显微镜下观察细胞密度，汇合度约为60%，未达到细胞传代要求的汇合度80%的要求，将培养瓶中培养液吸出，留10ml培养液继续培养，细胞形态呈现圆形或梭性。过了2d后细胞汇合度超过80%后，按细胞传代要求进行传代。　　细胞高度恶性，未分化。癌细胞体积小，核圆形和卵圆形，癌细胞胞浆少，核浆比例明显增大，核外形不规则，核分裂多见，癌细胞界限不清。　　2.2.212细胞传代继续培养细胞，直到细胞汇合度达到细胞传代为80%的要求时，进行细胞传代。在NCI

7、-H446细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶，消化3～6min，加入培养基吹打，制作成细胞悬液按1∶2传代。按细胞培养条件进行传代，经过3次传代培养后，细胞一共有8瓶。细胞形态呈现圆形或梭性，将其中4瓶冻存。将2瓶用于后续实验，另外2瓶继续传代培养。　　2.3细胞生长曲线绘制　　2.3.1细胞加样计算细胞浓度2次，得出细胞浓度平均值。然后将细胞悬液等量的加入培养板的每个孔中，每天观察4个孔，培养时间计为7d。　　2.3.2观