克瘤丸体外对人肺癌细胞株a549的抑制作用研究论文

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1、克瘤丸体外对人肺癌细胞株A549的抑制作用研究论文【摘要】目的研究中药复方克瘤丸3种提取方法的提取物体外对人肺癌细胞株A549抑制作用，探讨克瘤丸剂型改革的方向。方法采用MTT法测定克瘤丸3种提取方法的提取物对人肺癌细胞株A549增殖的抑制作用。结果克瘤丸组合提取法取得的提取物抑制率明显高于其他两种提取方法；当药物浓度为5mg/ml时，对肺癌细胞有明显的抑制作用；克瘤丸对肺癌细胞株增殖的抑制呈一定的时间和浓度的依赖性，随着时间和浓度的增加逐渐增强。结论克瘤丸体外具有显著抑制人肺癌细胞株A549的作用，组合提取法有望成为今后剂型改革的研究方向。【关键词】克瘤丸；提

2、取方法；人肺癌细胞株A549Abstract：ObjectiveToparetheinhibitoryinfluenceamongthreedistillmethodsofKeLiupillontheproliferationofhumanlungcancercelllineA549andtoresearchthebestformofmedication.MethodsKeLiupillethods,andtheeffectsofthreeextractsonhumanlungcancercelllineA549ethodarkableinhibitoryeff

3、ectonhumanlungcancercelllineA549attheconcentrationof5-10mg/ml.Inaddition,theinhibitionofKeLiupillonproliferationofcellgroe-dependedmannertosomedegreeandtheeffecte.ConclusionKeLiupillhasremarkableeffectinfluenceonhumanlungcancercelllineA549invitro.Integratedextractedmethodisvaluablefo

4、rmofmedication.Keyethod;HumanlungcancercelllineA549我科在学习历代中医文献，结合多年临床经验和反复临床实践的基础上，围绕肺癌的病机特点，提出了“祛瘀解毒.freela公司产品，以生理盐水配制成5mg/ml浓度)；二甲基亚砜（DMSO，上海凌峰公司产品，分析纯）。1.3克瘤丸购自江苏省中医院药房，批号20041201。2方法2.1克瘤丸不同提取物的制备2.1.1样品Ⅰ组合提取法，取200g粗粉CO2超临界萃取后，药渣醇提（70％乙醇）后合并提取液，微波真空干燥，即为样品I的浸膏（4.39g粗粉/g）。2.1.2样品

5、Ⅱ半仿生提取法，取200g粗粉加pH为1酸水提取再加pH为8碱水提取，合并提取液，浓缩成稠膏后微波真空干燥(5.13g粗粉/g)。2.1.3样品Ⅲ水提法，取200g粗粉加水提取滤过，浓缩成浸膏，再微波真空干燥（3.9g粗粉/g）。称取适量各样品，蒸馏水配置至1g/ml（相当于生药）。灭菌备用。配药：将上药用完全培养液于实验前稀释后得5种终浓度：20，10，5，2.5，1.25mg/ml供实验用。以上药物均实验前新鲜配用。2.2四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法在含10%小牛血清的1640培养液中培养细胞，在细胞达到指数增长期时用于实验。记数细胞浓度为2.5×104/

6、ml，接种于无菌的96孔培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液200μl，培养24h后吸去原有的培养液，分别加入各200μl的5种不同浓度克瘤丸，设空白对照孔加完全培养液，实验对照孔加肿瘤细胞，每组均为5复孔。混匀后置于37℃，5%CO2培养箱中继续培养24h。于结束前4h每孔加入20μl浓度为5mg/mlMTT，继续培养4h后吸去全部上清液，每孔加入二甲基亚砜200μl溶解液，微型混合器振荡10～15min，充分溶解，用酶联免疫检测仪于620nm波长处测定光密度OD值，按抑制率计算公式计算抑制肺癌细胞的百分率。2.3最佳药物提取方法的确定用上述方法得出克瘤丸不同提取方

7、法对肺癌细胞的作用。2.4最佳药物浓度的确定用上述方法得出克瘤丸不同浓度对肺癌细胞的作用，选取的不同药物作用浓度分别为：20，10，5，2.5，1.25mg/ml。2.5最佳药物作用时间的确定用上述方法得出克瘤丸不同时间对肺癌细胞的作用，选取的不同药物作用时间分别为:12，24，36，48，72h。2.6肿瘤细胞抑瘤率计算公式抑瘤率（%）=1-(OD实验组-OD空白组)(OD实验组-OD空白组)×100%3结果3.13种提取方法所得提取物体外对肺癌细胞株抑制作用比较克瘤丸样品Ⅰ抑制率明显高于其他二种提取方法，样品Ⅱ的作用较弱，样品Ⅲ几乎没有抑制作用，因此，选取样

8、品Ⅰ进行下一步实验。结果