宫颈癌新辅助化疗对缺氧诱导因子—1α表达与血清血管内皮细胞生长因子的影响-(7896)

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1、t【’《～四川I犬学硕t论文重要意义。VBGF在诸多促进肿瘤血管生成的因素中，起着最基础、最关键的作用。ⅧGF的高表达与多种恶性肿瘤的微血管密度增高、早期转移和预后不良有关。在许多恶性肿瘤中，VBGF表达水平己成为一种监测肿瘤复发或患者生存率的预后因素，是一个很有价值的肿瘤标记物嘲。由此可见，肿瘤血管生成与肿瘤患者的预后明显相关。本研究旨在通过检测宫颈癌患者、新辅助化疗前后HlF-1a及血清VE[手表达的变化，探讨肿瘤细胞中乏氧及血管生成与NAcr疗效的关系，探讨HIF-ld及V5GF与NA四疗效是否相关，能否作为新辅助化疗疗效的预测指标，

2、以期进一步探索新辅助化疗的临床应用范围和价值。2，《_k四川大学硕十论文第一部分宫颈癌组织中的HIF_1a表达和患者血清VEGF水平的意义材料与方法l研究对象收集2005年lO月至2006年2月于四川大学华西二院收治的28例宫颈鳞癌患者，临床分期采用国际妇产科联盟(FIG0)1985年修订的临床分期标准，所有宫颈癌患肯术前均未行任何治疗，直接手术治疗；47例CIN患者；另lO位健康志愿者作为对照。标本采集：l组织标本采集：所有组织标本均来自直接活检标本或手术后大体切除的标本。2血清样本采集：所有患者育活检前或手术前取2ml外周静脉血。室温自

3、然凝固后，2000转／分钟离心10分钟，分离血清，采集血清样本，置-20"C保存。2主要试剂和仪器2．1主要试剂．(1)浓缩型兔抗人多克隆HIF-1n抗体购自ch锄icon公司(2)过氧化物酶标记的链霉卵白素(Se--0001)免疫组化染色试剂盒购自北京中衫公司(3)DAB染色剂购自北京中衫公司(4)人VEC,FELISA试剂盒购自晶美公司(5)P13S缓冲液(6)lmMEDT^(P}H0)溶液(7)AP匿胶(8)3j6过氧化氢2．2主要仪器(1)国产电控恒温箱(2)国产冰箱(3)0LY咿峪显微镜(4)芬兰产L^BsYsrD心酶标测试仪(5

4、)国产离心机3实验步骤和方法3，l‘-，1f四川大学颅卜论文4实验结果的判断：HIF-1o在石蜡切片中阳性染色主要定位f细胞核，细胞浆也有表达，呈现棕黄色颗粒。采用Zhong嘲方法，综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比，对HIF-IQ表达作半定量评定。按阳性细胞率评分：阳性细胞数占10咿'-50％为2分；占51％～80％为3分；>8096为4分。按显色程度评分：无着色为0分；着色弱但明显强于阴性对照者为1分；染色清晰者为2分，强染色为3分。然后将两种评分结合起来分为4级：无论染色强度如何，细胞阳性率<1096为阴性；2～3分为弱阳性(一

5、；4～5分为中度阳性(++)；6～7分为强阳性㈩。VEGFELISA法结果是按照晶美公司提供的VEGFEkISA试剂盒说明书进行计算。以标准品浓度作横坐标，∞值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点，绘制标准曲线。通过标本的0D值可在杯准曲线上查出其相应浓度。5统计学处理应用SPSSIO．0统计软件对数据进行统计学处理。计量资料分析采用t检验、单因素方差分析(onelayA阿呦；计数资料分析采用r检验，校正)F检验。运用Spearman等级相关分析HI卜lQ、Vff-，F的相关性。结果l宫颈癌、CⅢ组患者及正常对照组的临床资料宫颈鳞癌组患者

6、年龄在28～67岁之间，平均年龄为蛾7岁。．其中I期15例，Il期13例。CIN组患者年龄在24～57岁之间，平均年龄为37．9岁。其中CINl6例，C矾116例，重度非典型增生21例，宫颈原位癌14例。正常对照组年龄在23～51岁之间，平均年龄为39L3岁．见表I、2。5．1．，，、删川大学硕寸论文2HIF-lQ在正常对照组、CIN组及宫颈鳞癌组织中的表达HIF-la在正常宫颈组织中无表达，CI'qII的阳性表达率为31．4％，宫颈鳞癌中阳性表达率为57．1％，三组之间比较差异有显著性(P

7、％)，原位癌的阳性表达率(42．鳓及宫颈癌I期(53．3％)均明显高于正常对照组(P

8、癌组、宫颈鳞癌I期三组相比阮053宫颈鳞癌组织中HIF-Ia的表达与临床病理关系在宫颈鳞癌组织中，mF．1a的表达在宫颈『日J质浸润深度≥l／2者为81．896(g旷11)，浸润